肾宝合剂主要成分的薄层鉴别

　　肾宝合剂收载在卫生部药品标准中药成方制剂[1]第十五册，肾宝合剂由黄芪、红参、五味子、淫羊藿、白术、制何首乌、熟地黄、等二十二味中药提取加工制成，具有温阳补肾，调和阴阳，安神固精，扶正固本的功效，用于遗精，阳痿，腰腿酸痛，夜尿频多，精神不振，畏寒怕冷[2-4].通化万通药业肾宝合剂是依据2005年药典制备的，现在2015年药典已经颁布，其中肾宝合剂的药品质量标准有所变动，因此本文以2015年药典为标准，对通化万通药业肾宝合剂进行质量定性.

　　索氏提取器ZF-1型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）硅胶G薄层板（自制）sartorious BP211—D型电子天平（十万分之一德国sartorious公司）超声波处理器HS10260D型定量毛细管（XDrum-mond公司）SHB-ⅢA循环水式多用真空泵

　　品名批号提供单位

　　肾宝合剂市售品20150901吉林万通集团

　　黄芪对照药材————–通化市医药大厦

　　黄芪甲苷对照品110781-201515中国药品生物制品检定所

　　黄芪、何首乌、补骨脂对照药材由万通药业研发部部长曲香仁鉴定，阴性样液（按处方药味除去被测药材，其余药材按制剂的制备工艺制得）硅胶G由青岛海洋化工厂生产，试验用水为纯化水，其余所用试剂为分析纯.

　　取本品50ml，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次50ml，合并乙酸乙酯液，药液备用；乙酸乙酯液用5%碳酸钠溶液振摇提取3次，每次20ml，振摇后的溶液水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯搅拌使其溶解，醋酸乙酯的用量为1ml，作为供试品溶液.取淫羊藿苷对照品，加甲醇适量制成2号每1ml含1mg的对照品溶液，配制对照品溶液.取缺淫羊藿阴性对照溶液同1号供试品制备方法制成3号溶液待用.展开剂展开剂为乙酸乙酯-甲醇-水，比例为100：17:13,充分展开，取出薄层板，晾干，喷以AlCl3溶液，加热3min，温度为105℃。

　　在色谱图中，1号与2号溶液对应的位置上显相同颜色的亮黄色斑点，且斑点的Rf值相对应，3号阴性样液无干扰，说明供试品溶液中有淫羊藿苷成分.

　　1供试品溶液

　　2淫羊藿苷对照品溶液

　　3缺淫羊藿阴性对照溶液

　　取淫羊藿鉴别项下的碳酸钠药液，水饱和的正丁醇用量为50ml，平均分3次萃取合并萃取3次所得正丁醇溶液，用氨水洗涤2次，每次50ml，弃去碱水层，饱和的水溶液再用正丁醇洗涤2次，正丁醇饱和溶液用量为100ml，平均分2次萃取，所得正丁醇液水浴上加热一段时间蒸干，用甲醇溶解残渣，甲醇的用量为5ml，放冷，作为1号供试品溶液.另取黄芪药材5g放入容器中，加水煎煮1.5h，提取出药材中的有效成分过滤，滤液加乙醇配成含醇量达60%的乙醇，所得滤液合并，将其蒸干，残渣加水适量溶解后，按1号溶液的制备方法制成2号对照药材溶液.制成每1ml含1mg的3号溶液需曲黄芪甲苷对照品加适量乙醇即得.吸取1号溶液10μl、3号溶液5μl，对照药材5μl分别进行点板，点板展开剂为三氯甲烷－甲醇－水（13：6：2）在10℃以下放置10h以上所得下层溶液作为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下烘至斑点显色清晰，在紫外光（365nm）下检视.

　　黄芪色谱图中，1号与3号黄芪甲苷对照品色谱相对的位置上显荧光斑点，2号和3号显色斑点Rf值相对应，说明供试品中有黄芪甲苷成分，1号和2号的Rf值也相对应，且4号无斑点，说明供试品中有黄芪甲苷成分.

　　1 1供试品溶液

　　2黄芪对照药材溶液

　　3黄芪甲苷对照品溶液

　　4缺黄芪阴性对照溶液

　　2.3何首乌TLC鉴别与结果

　　取淫羊藿鉴别下的碳酸钠溶液，用盐酸调pH值2-3，乙酸乙酯溶液，每次30ml，2次，收集合并醋酸乙酯溶液，水浴锅加热蒸干，剩余残渣加乙酸乙酯不断搅拌，使残渣溶解，乙酸乙酯用量为1ml，作为1号供试品溶液，另取何首乌对照药材0.3g，乙酸乙酯回流提取30min，用量为20ml，放凉,将提取液滤出，所得滤液振荡提取3次，5%碳酸钠溶液每次20ml，合并所得溶液，在同上述供试品的制备方法制成2号对照药材溶液，制每1ml含1mg的大黄素对照品溶液，需要取大黄素对照品加适量乙酸乙酯即可.吸取供试品溶液20ul、对照药材溶液、对照品溶液5ul，在硅胶板上点样，展开剂为石油醚（60～90℃）－甲酸乙酯－甲酸，比例为（15：10：1），溶液展开后，取出，自然晾干，日光下检视.

　　在何首乌色谱图中，1号溶液与2号溶液色谱，更加说明了供试品中有大黄素成分，该法可以作为肾宝合剂中对何首乌的鉴别.

　　1供试品溶液

　　2何首乌对照药材溶液

　　3大黄素对照品溶液

　　4缺何首乌阴性对照液

　　取肾宝合剂50ml，乙醚每次50ml，振摇萃取两次，收集所得乙醚液，加热使乙醚快速挥干，残渣加乙酸乙酯溶解，用量为2ml，作为1号供试品溶液待用.另取补骨脂对照药材0.2g，加水煎煮，目的为提取药材中的有效成分，时间30min，水的用量为50ml，将药液滤出，所得滤液同1号溶液法制成2号对照溶液.制成3号，每1ml含1mg的对照品溶液，需取补骨脂素对照品加适量的乙酸乙酯,吸取上述待用的3种溶液，分别为2ul，在硅胶剂板上进行点样.展开剂为正己烷－乙酸乙酯，比例为（3：1），溶液展开后取出板晾干，显色试剂为氢氧化钾甲醇溶液，

　　紫外光下显示在补骨脂色谱图中1号与3号对照溶液色谱对应位置，显相同颜色的荧光斑点，且斑点Rf值相对应，说明供试品中有补骨脂素成分.2号与3号溶液相应的位置也出现了颜色一样的荧光斑点，Rf值同样对应，更加验证了供试品中有补骨脂素成分，4号阴性对照无斑点，表明该法可以作为肾宝合剂中补骨脂的鉴别.

　　1供试品溶液

　　2补骨脂对照药材溶液

　　3补骨脂素对照药材溶液

　　4缺补骨脂阴性对照液

　　本实验成功的完成了补骨脂、黄芪、淫羊藿、何首乌的定性鉴别，在定性鉴别中，确认出肾宝合剂中含有补骨脂素、黄芪甲苷、淫羊藿苷、大黄素成分，之所以对处方中补骨脂、黄芪、淫羊藿、何首乌进行鉴别，因为以上四味药为肾宝合剂中君药，因此对其以上4种药进行实验，以控制其内在质量标准，之所以选用TLC法是由于其专属性强、分离度好、方法简便准确、灵敏度高.

　　以上对肾宝合剂中4味药进行了薄层色谱鉴别，在定性鉴别中，确认出肾宝合剂中含有淫羊藿苷、黄芪甲苷、大黄素、补骨脂素成分，符合2015版药典的规定，可以作为肾宝合剂质量控制项目.

　　本论文是在李成华老师的指导与帮助下完成的，在此我向李成华老师表示感谢！同时感谢在实验过程中帮助过我的实习单位金文淑老师的辅助指导！是吉林万通集团给我这次实习的机会，在此也同时表示感谢！

　　[1]张梅，李平，陈朝晖.中药治疗骨关节炎机制的研究进展[J].医学基础与药学研究，2003,2(2)：49-51

　　[2]国家药典委员会.中国药典一部[s].北京医药科技出版社，2010：149,36-37,220

　　[3]国家药典委员会编。中华人民共和国药典（2005版一部）[S].北京：化学工业出版社，2005

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　　[5]车晓彦，贺亚玲，尹靖先，等.复方鱼腥草片的鉴别和含量测定[J].华西医学杂志，2005,20（1）：65-67

　　[6]刘东风.同时鉴定小儿氨咖黄敏颗粒中3种成分的薄层色谱法[J].中国药业，2009,18（23）：27

　　[7]吕长淮.氨咖黄敏胶囊薄层色谱鉴别方法的改进[J].安徽医药，2006,10（2）：109-110

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