蔬菜中敌敌畏的测定

　　摘要:

基于有机磷农药对过氧化氢有着氧化联苯胺反应的催化作用，本文以敌敌畏为例，用TritonX－114为萃取剂，研究了蔬菜表面敌敌畏的含量。在pH值为8.5的氨缓冲溶液中，过氧化氢溶液与盐酸联苯胺在敌敌畏的催化作用下生成稳定的黄色配合物，经浊点萃取测定敌敌畏的含量。配合物的最大吸收波长为425nm，在0μg250μg范围内吸光值呈良好的线性关系，相关系数为0.9998，表观摩尔吸光系数ε为5.3×104L·mol-1·cm-1，方法检出限为22.2μg/L，对5种蔬菜中敌敌畏的残留量进行了分析，平均回收率为82.3%～102%，RSD≤8.9%。

　　关键词:敌敌畏；浊点萃取；蔬菜

　　第1章引言

蔬菜中残留的敌敌畏，对于广大人民群众来说都是值得注意的问题，伴随着我国经济的不断发展，我国的是食品安全也频繁出现问题，很多不良商家为了谋取高昂的利润，枉顾国家法律与政策，特别是在使用农药这一块，没有按照规定来操作，导致很多的农产品农药残留量超标甚至严重超标，极大地危害了广大消费者的人身安全，而国家安全监测部门也往往不作为，让人民群众很难安心的去购买农产品，也很难买到新鲜安全的农产品，为此笔者特意对此作了几个实验，以探究市场上流通的蔬菜中农药的残留量到底有多少，是否于人体有害，也希望结果能让我们放心。

目前较为广泛使用的测定有机磷农药的方法主要有气相色谱法(GC)、气相色谱－质谱联用法(GC－MS)、酶活性抑制法、分光光度法等。GC和GC－MS法虽然在实验测定中定量准确，但因为设备价格昂贵，而且样品前处理繁琐，对操作人员的要求较高；酶活性抑制法中常用的乙酰胆碱酯酶(AChE)的酶源主要来自猪脑、鸡脑、鼠脑、蝇头、电鳗和马血清等，这些酶的提取需要大量时间且步骤繁琐，然而购买纯酶价格昂贵，而且酶的寿命短，使用中也受到限制。本实验基于有机磷农药对过氧化氢与联苯胺反应的催化作用，测定蔬菜表面敌敌畏的含量，以表面活性剂TritonX－114为萃取剂，建立了浊点萃取催化光度法测定有机磷农药实验方法。本实验方法与常规的分光光度法相比具有好几个优点，灵敏度高，仪器价廉易普及，操作简单，测定成本低，萃取剂易回收，对环境无污染。

在现实生活中，有机磷农药大多作为常用杀虫剂,使用广泛,对人畜及环境具有较大的危害性,特别是近几年农药残留量过高引起的食物中毒的概率大有逐渐上升的趋势。因此,蔬菜中的有机磷农药污染日益引起了广大人民群众的重视。实践中，对敌敌畏等有机磷农药的监测普遍是采用气相色谱法、薄层酶抑制法、化学发光法等,上述方法操作繁琐,对实验条件要求高,采用浊点萃取催化光度法测定蔬菜中的敌敌畏,具有稳定、检出限低之特点,得出的实验数据的精密度和准确度令人满意。

　　第2章试验

　　2.1主要仪器与试剂

722S型分光光度计，电热恒温水浴箱;PHS－3B型雷磁精密酸度计;RE－2000A型旋转蒸发器，100mg/L敌敌畏标准溶液，农业部环境保护科研监测所研制;25.0mg/L敌敌畏标准工作溶液:取25.00mL100mg/L敌敌畏标准溶液，置于100mL容量瓶中，用乙醇稀释至刻度;2g/L盐酸联苯胺溶液;10%过氧化氢溶液;氨缓冲溶液(pH值为8.5);4%TritonX－114溶液。

　　2.2试验方法

在25mL比色管中，加入25.0mg/L敌敌畏标准工作溶液3.00mL，2g/L盐酸联苯胺溶液和NH3－NH4Cl缓冲溶液(pH值为8.5)各1.5mL，10%过氧化氢溶液3.0mL，4%TritonX－114溶液6.0mL，用去离子水定容至25mL。在75℃恒温水浴中加热35min，取出冷却。将上层水相弃去，下层有机相稀释至5.00mL，用1cm比色皿，在425nm波长下，以试剂空白为参比，测量吸光值。

　　第3章结果与讨论

　　3.1吸收曲线

提取适量的敌敌畏标准工作溶液显色、萃取后，以空白试剂溶液作为参照，改变波长，测量吸光值，发现黄色配合物对试剂空白的最大吸收产生在420nm～430nm之间，见图1。因此，该试验选择425nm作为测量波长。

　　3.2pH值的影响及缓冲溶液用量试验

在pH值1～10的范围内试验，结果表明，当pH值在1～8之间时，吸光值随pH值增加而增大；当溶液pH值在8～9之间时，测取到的吸光值最大；当pH值＞9时，测取到的吸光值开始缓慢下降。因此，本试验选择试剂溶液pH值为8.5时是最佳条件，pH值为8.5的NH3－NH4Cl缓冲溶液用量试验表明，当其加入体积在1.0mL～1.7mL之间时，测取到的吸光值基本不变。因此，该试验选择加入pH值为8.5的氨缓冲溶液1.5mL。

　　3.3显色剂用量的影响

在25mL比色管中，加入25.0mg/L敌敌畏标准工作溶液3.00mL，NH3－NH4Cl缓冲溶液(pH值为8.5)1.5mL，固定加入过氧化氢溶液的体积，改变盐酸联苯胺溶液的加入体积。结果表明，随着盐酸联苯胺用量增加，吸光值增大，当其加入体积达到1.0mL～2.0mL时，吸光值最大。在上述体系中，固定盐酸联苯胺溶液加入体积为1.5mL，改变过氧化氢溶液加入体积。本实验结果表明，随着过氧化氢用量增加，黄色加深，当其加入体积达到1.0mL～3.5mL时，吸光值最大，超过3.5mL时有沉淀产生。因此，该试验选择加入过氧化氢溶液3.0mL。

　　3.4表面活性剂用量的影响

TritonX－114的用量决定萃取分离的效果。本实验测定了4%TritonX－114溶液用量对浊点萃取效率的影响，结果表明，当其加入体积在2．0mL～4．5mL范围时，吸光值随着体积增加而增大；当加入体积在4．5mL～7.0mL范围时，吸光值达到最大且变化平缓。因此，该试验选择加入4%TritonX－114溶液6.0mL，此时体系中TritonX－114的体积分数为0.8%。

　　3.5加热温度与时间的影响

当非离子表面活性剂水溶液被加热时，且一旦超过某温度时，溶液就会出现浑浊和相分离的现象，即浊点现象，此时黄色配合物溶解在有机相中而得到分离。本实验分别在不同温度下进行加热时间试验，最后发现当温度低于70℃时，溶液不分相，温度高于80℃时有大量气体产生。在70℃和80℃的温度下加热时间超过35min，两相分明，测得的吸光值最大。因此，本试验选择在75℃下水浴加热，时间为35min。

　　3.6显色体系稳定性

本实验在最佳试验条件下，分别测量了不同时间段的吸光值，结果表明，显色反应能瞬间完成，且生成的有色物质在3h内，吸光值的变化≤±4%。

　　3.7方法选择性试验

用该方法测定含有共存离子的3mg/L敌敌畏溶液，当相对误差≤±5%时，以下共存离子的允许倍数分别为:Al3+、Zn2+(3000);Na+(750);Ca2+(400);K+(300);Mg2+(100);Cu2+(40);Fe3+(5);MnO－4、BrO－3(0．2)。杀虫双、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氯氰菊酯、氰戊菊酯及氨基甲酸酯类农药不干扰测定。由于大多数有机磷农药如敌百虫、乐果、氧化乐果等均对过氧化氢氧化联苯胺反应具有催化作用，所以也可以参照该方法分别测定。

　　3.8标准曲线与检出限

在最佳试验条件下绘制标准曲线，结果显示，在0μg～250μg范围内，敌敌畏催化过氧化氢－盐酸联苯胺的体系服从朗伯－比尔定律，表观摩尔吸光系数ε为5.3×104L·mol－1·cm－1，回归方程为y=0.0087x(μg)－0.0082，相关系数r=0.9998。对空白溶液平行测定11次，根据3σ/K计算检出限为22.2μg/L。

　　3.9样品分析

准确称取两组无农药油麦菜、甘蓝、小白菜、菠菜、油菜各15g，在其中一组蔬菜上分别喷洒0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20mg/kg敌敌畏标准溶液后，将菜叶剪成1cm左右的碎片，浸入50mL丙酮溶剂中震荡提取、过滤，滤渣反复振荡提取3次，合并提取液，用旋转蒸发器浓缩至10mL左右。同时，按上述方法处理另一组无农药蔬菜，用该试验确定的方法测定。上述样品均平行测定5次，计算5种蔬菜的敌敌畏加标回收率与RSD，结果符合农药残留分析的要求。

　　4结论与展望

　　4.1结论

浊点萃取法是近年来新出现的一种液—液萃取技术，该实验方法不使用挥发性有机溶剂，不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，改变实验参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分离。浊点萃取催化光度法是一种灵敏、简单、环保的检测方法，测定灵敏度比常规的分光光度法高。本实验使用TritonX－114作为萃取剂，无毒、无味、不挥发，对实验操作人员和环境不造成危害，且其密度较高，有利于相分离，易回收，萃取1次的用量仅0.2mL左右。实验使用的仪器价格低廉，对于蔬菜样品中敌敌畏的测定，测得的数据的准确度与精密度均能满足检测要求，并且对于其他有机磷农药也可参照该方法来测定。应用RP-HPLC法分析检测蔬菜中的敌敌畏,具有分析时间短、结果稳定、准确、灵敏且简单易行的特点,比传统的气相色谱法更能满足目前的要求,回收率均大于80%,其最低检测限低于国家规定的最大残留限量,各项指标均符合农药残留测定所允许的范围内。从实验得出的结果分析可知,还是有部分蔬菜的农药残留量较大,超过国家规定蔬菜中农药残留量限度,广大消费者应加以重视。广大消费者日常购买农产品时，最好在将蔬菜买回后用适量清水浸泡一段时间，以减少蔬菜中农药的残余量，也是为了自身的健康出发，我国市场缺乏有效的监督，存在着大量的食品安全问题，这也提醒我们在日常生活中应该多多注意，以防食品健康问题。

　　4.2对未来的展望

伴随着我国经济的不断发展，我国的是食品安全也频繁出现问题，很多不良

商家为了谋取高昂的利润，枉顾国家法律与政策，特别是在使用农药这一块，没有按照规定来操作，导致很多的农产品农药残留量超标甚至严重超标，极大地危害了广大消费者的人身安全，而国家安全监测部门也往往不作为，让人民群众很难安心的去购买农产品，也很难买到新鲜安全的农产品，为此希望有关国家部门针对食品安全问题加大查处力度，严格确保我国食品质量安全，让广大人民有一个安全的食品环境，让广大老百姓吃的放心，买的放心。特别是严重影响身体健康的食品安全问题方面，更是需要严格查处，净化市场环境，加大对无良商家的惩罚力度，让市场回归正常，也给广大消费者一个信赖的市场，这也有利于我国市场经济的正向发展，当前我国经济处于发展的关键期，更需要在食品安全方面做出表率。

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　　致谢

三年的学习生涯即将结束，在此，首先谢谢学校给了我完成学业的机会，非常感谢学校教育培养了我三年，感谢母校。

特别感谢我的导师对我在论文写作过程中的悉心指导和大力支持，从论文选题，到写作框架的结构，到调查问卷设计和访谈提纲的确认，以及写作的具体过程，老师都给了我详细的指导和建议。其次，老师对学术研究的认真态度，深深的影响了我。原本我是一个比较粗心大意、办事拖拉的人，经过这次论文写作，我一定会改变我自己原本拖沓的工作态度。感谢在我做问卷调查和访谈期间，无私付出时问和精力帮我的人们，谢谢你们，是你们的帮助让我顺利完成了调查和访谈，在做实验的过程中遇到了很多的问题，也是导师不厌其烦的指导我的实验，才让我最后成功的完成了实验，非常感谢我的老师。

感谢我的导师，他们严谨细致、一丝不苟的作风一向是我工作、学习中的榜样；他们循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪。感谢我的老师，这篇论文的每个细节，都离不开你的细心指导。也要感谢我的室友们，感谢你们对我实验的支持和帮助，以及对我在生活中的照顾，从遥远的家来到这个陌生的城市里，是你们和我共同维系着彼此之间亲人般的感情，维系着寝室那份家的融洽。三年了，仿佛就在昨日，三年里，我们没有红过脸，没有吵过嘴，没有发生上大学前所担心的任何不开心的事情。只是今后大家就难得再聚在一齐吃每年元旦那顿饭了吧，没关系，各奔前程，大家珍重，我们在一起的日子，我会记一辈子的。最后还要感谢我的爸爸妈妈，焉得谖草，言树之背，养育之恩，无以回报，你们永远健康快乐是我最大的心愿，读书期间，你们给了我很大的支持，是你们的默默付出才让我有机会完成学业，感谢你们。

在论文即将完成之际，我的情绪无法平静，从开始进入课题到论文的顺利完成，有多少可敬的师长、同学、朋友给了我无言的帮忙，在那里请理解我诚挚的谢意，感谢你们的帮助与支持。