沙棘果油的提取及对小鼠烫伤的影响

　　LC-GC2010Plus气相色谱、氢火焰电离检测器(FID);AR1140,DV215CD电子天平;Tgl-15b离心机(上海安亭科学仪器厂)。

　　1.2试药

　　棕榈酸酯控制(中国食品药品检验所，批号):190029-201202);沙棘的新鲜果实是从陕西省咸阳市提取出来的，由陕西省食品药品监督管理局的药师郭尧武鉴定为沙棘的果实。体积分数为氟化三氟化甲醇溶液的14%(上海maclin生化科技有限公司，批号20160201);对甲醇、氢氧化钠、醚、无水硫酸钠进行了分析。正己烷是色谱纯。

　　根据初步实验结果，确定试验因素为纸浆温度、离心速度和离心时间，各因子设置3个水平，设计正交试验，各因素如表1所示。沙棘果实1000克,挤压,种子和皮肤的果肉L9(34)实验列号的所有条件提取原油、沙棘原油用无水硫酸钠除水后沙棘果实油,根据质量和确定棕榈酸的含量。

　　表1Ｌ9（34）正交实验因素与水平

　　精密称量和棕榈酸对照品56.29毫克,放在20毫升管,加甲醇2毫升,摇匀,加入0.5摩尔·L1氢氧化钠甲醇(2g100毫升的甲醇溶液中氢氧化钠溶解3毫升,充氮,放在50℃水浴加热5分钟后,添加2.0毫升的三氟化硼甲醇溶液的体积分数为14%,充氮60℃水浴加热10分钟,搬到分液漏斗,冲洗管三次,每次10毫升,乳液分液漏斗,用乙醚提取3次,每次15毫升,合并醚,乙醚和无水硫酸钠液体过滤器,合并醚液体,使用液态氮吹干醚、己烷和移除残留25毫升容量瓶,稀释比例,摇匀,作为参考物质流动储备。取备用液体3mL，放入10mL瓶中，用正己烷稀释，摇匀，作为对照溶液。

　　取沙棘果油0.75ｇ，精密称定，按照2.2项下方法制备样品溶液。

　　色谱柱agilenthp-ffap(30mx0.53mm,1.0m);载气高纯度氮，速度:10mL·min-1,FID检测器;进样口温度:215℃;检测器温度:230℃。色谱柱温度:165;氢气流量:40毫升·最低为1;空气流量:400毫升·最低为1;尾巴的打击:8毫升·最低为1;分比:20:1;结果如图1所示。

　　2.2项下对照品溶液1、2、3、4和5毫升,分别放在10毫升容量瓶,产能规模正己烷稀释,摇匀,根据色谱条件2.4样本,样本数量作为横坐标(x)的峰面积垂直(y),线性回归,回归方程y=721520x+5632,r=0.9990。结果表明，棕榈酸酯在0.2252-1.1260mg·ml-1之间具有良好的线性关系。

　　Ａ.对照品；Ｂ.沙棘果油样品；1.棕榈酸甲酯

　　对棕榈酸酯的溶液进行了仔细的吸收，色谱条件连续6次进行，测量峰面积。计算的RSD值为1.86%。结果表明，其精度较高。

　　同一批次的6份沙棘果油样品，分别根据2.3的样品溶液制备方法，在2.4样品色谱条件下，RSD值的酸含量计算为2.17%，结果表明方法重复性好。

　　提取样品溶液的精度，根据2.4的色谱条件，分别在1、2、4、8、12h样品中，峰面积的测定，计算RSD值为2.26%，结果表明样品溶液稳定性在12小时内。

　　精度根据已知的内容沙棘果实油、0.35g,总共6,分别添加棕榈酸对照品的质量,根据样品溶液的制备方法在2.3,在2.4样品色谱条件,确定棕榈酸的量,计算恢复RSD值2.21%,结果表明,该方法样品回收率是好的。

　　说,隔绝的沙棘适量水果油,根据样品溶液的制备方法在2.3,2.4样品在色谱条件下,确定棕榈酸的含量,用沙棘果实油和产品综合分数棕榈酸含量,结果如表2所示。方差分析结果如表3所示。

　　表2沙棘果油提取工艺正交实验设计及结果

　　从表2可以看出，离心速度对acanthus油的分离影响最大，其次是纸浆温度和最小离心时间。从表3可以看出，离心速度和纸浆温度对分离效果有显著影响，但离心时间的影响不明显。优化工艺条件为A2B3C1，即果肉加热至60度，离心10min至8000r·min-1。2.11验证实验以沙棘果实1000克,挤压,果浆加热到60℃,8000r.离心10分钟分钟-1沙棘原油、无水硫酸钠除水后沙棘果实油,说质量分别为9.882,9.756和9.902g。棕榈酸酯的含量分别为25.87%、26.91%和26.26%。结果表明，正交试验筛选的最佳提取条件具有较高的可操作性和可重复性。

　　3.1.1动物

　　健康的SD大鼠,雌雄兼用,体重200±20g,由西安医科大学实验动物中心提供。

　　3.1.2药品

　　沙棘籽油(SBSO，批号):85921)和acanthusoil(SBPO,batchno.):85922)，由芬兰shierku大学提供的超临界萃取法提取。Solcoseryl-果冻软膏(批号)(644511)由瑞士一家大型制药厂生产。

　　3.1.3试剂

　　脱氧核糖核酸(DNA)，中国·上海长阳制药厂。氯化钠,。中国·西安化学试剂厂。Chlorform,。·天津化学试剂二厂。异戊基酒精。中国·西安化学试剂厂。95%乙醇,。中国西安化学试剂厂。二苯胺(二苯胺)a.r。·成都化学试剂厂。冰醋酸,。中国西安化学试剂厂。硫酸,。中国·西安化学试剂厂。氢氧化钠,。中国·西安化学试剂厂。核糖核酸(RNA)，中国·上海长阳制药厂。丙酮,。(丙酮)中国天津化学试剂二厂。Citricacidmonohydrate,。R，(柠檬酸，H2O)中国·湖南地质实验研究所。中国·上海玉山化工有限公司。二甲胺苯甲醛的。中国·西安化学试剂厂。高氯酸,a.r。·天津东方化工厂。l-羟脯氨酸(l-羟脯氨酸)中国上海康达氨基酸植物。

　　3.2.1SBPO和SBSO对大鼠皮肤烫伤的影响

　　健康SD大鼠66，女性和男性，体重200±20g。在实验室一周后，体重和性别被随机分为6组。每个组的大鼠在背部的左侧有3厘米宽4厘米的深度。2d,在乙醚麻醉,用75%的酒精消毒皮肤、脱毛与直径25毫米的塑料管道固定在皮肤脱毛,加入80℃热水10毫升,17世纪留下来,用纱布吸出的热水,把塑料管道,引起局部皮肤烫伤(II)。在烫伤后的二维中，阴性对照组的皮肤烫伤涂有生理盐水，每天使用l。在SBPO和SBSO上涂有SBPO和SBSO。SBPO和SBSO每天都被SBPO和SBSO覆盖两次。一个阳性对照组每天涂一层solcoseryl-果冻软膏。持续应用于伤口愈合。观察局部症状和伤口愈合时间。T检验组间的差异。

　　结果显示，在8-10d后，SBPO组、SBSO组和Solcoseryl-Jelly组的局部红肿明显减少，而阴性对照组的伤口分泌物明显减少。与阴性对照组相比,SBPOSBSO集团和Solcoseryl果冻,伤口愈合时间明显缩短,高、低剂量组和SBSOSBPO高,低水平的组比较,伤口愈合时间无明显差异(见表1),结果表明,SBPOSBSO可以缓解局部皮肤烫伤大鼠的症状,促进伤口愈合,以及SBPO和SBSO之间没有显著差异。

　　表4SBPO及SBSO对大鼠皮肤烫伤创面愈合的影响(X-±s,n=11)

　　3.2.2SBPO及SBSO对大鼠皮肤烧伤的影响

　　健康SD大鼠60，男性和女性，体重200±20g。在实验室一周后，体重和性别被随机分为6组。各组大鼠分别在背部左右两侧分别脱毛，脱毛3cm×4cm。2d,3%戊巴比妥钠腹腔内注射在大鼠麻醉后30毫克/公斤,浸泡在无水乙醇2厘米*2厘米大小的纱布块在脱毛部位,然后燃烧20年代,引起局部皮肤烧伤(2)[4],每个老鼠回到每一方都有一个燃烧表面。烧伤后，阴性对照组的皮肤每天一次涂上生理盐水。SBPO和SBSO低剂量组每天涂1次SBPO和SBSO。SBPO和SBSO高剂量组每天涂两次SBPO和SBSO。阳性对照组涂上了Solcoseryl-Jelly软膏。持续应用伤口愈合，观察局部症状和伤口愈合时间。T检验不同组间差异的重要性。

　　在烧伤后的14d中，用3%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉大鼠。然后回到右侧的燃烧表面全厚皮,分为两块,一块,用冷盐水清洗皮肤表面的血液,皮下脂肪刮掉,说其湿重,制成匀浆,根据文献报道的方法[5],DNA和RNA的提取,定量确定。另一块完整的皮肤厚度,用冷盐水洗表面血液后,用95%的乙醇脱水24小时,然后用丙酮、乙醚(v/v1:1)混合脱脂2次,每次24小时,取出后的110℃烘箱烘干,然后制成细粉,根据其重量,放在磨口管,加3m16m盐酸,发现,在110℃烤箱水解在10h,冷却后将被水解成10毫升容量瓶,6mnaoh调整pH值7.0,10毫升的水的能力,然后根据文献报道[6]的方法测定组织中羟脯氨酸含量,并计算组织中胶原蛋白含量。T检验不同组间差异的重要性。

　　结果表明，与阴性对照组相比，SBPO组和SBSO组的局部红肿明显减少，伤口分泌物减少。的伤口愈合时间SBPO集团SBSO组和Solcoseryl-Jelly组明显缩短,和之间没有显著差异在伤口愈合时间SBPO高、低剂量组相比SBSO高和低剂量组(见表2)。此外,没有重大改变DNA,RNA,皮肤烧伤组织羟脯氨酸和胶原蛋白含量(见表3、表4、表5)。上述结果表明,SBPO和SBSO可以减少局部皮肤烧伤大鼠的症状。它可以促进伤口愈合，SBPO和SBSO没有显著差异。小鼠皮肤烧伤组织中DNA、RNA、羟脯氨酸和胶原蛋白的含量均未受到明显影响。

　　沙棘的果实属于特种油。Yang等报道，沙棘种子含油量通常在10%左右，有的高达15%-16%。由于品种等因素，含油量为1.4%-13.7%。不饱和脂肪酸的沙棘籽油占71.2%-76.0%，亚油酸(C18:2n-6)含量最高(35.6%-39.0%)，亚麻酸(C18:3n-3)含量(27.8%-33.4%);沙棘果主要脂肪酸成分为棕榈油、油酸(32%-53%)、棕榈酸(25%-35%)、油酸(8%-26%)、亚油酸(5%-16%)和亚麻酸(0.6%-2.6%)。除了不饱和脂肪酸外,还有许多其他的生物活性成分,如维生素E、类胡萝卜素、甾醇,等。有人报道,生育酚在石油的总量为101.4-128.3毫克/100克,α-生育酚的含量和占总量的62.5%-67.9%。Ranjith等人的研究表明，新鲜果油中生育酚的含量为66.6-178.8mg/100g，其中-生育酚总含量的40%-60%，其他类胡萝卜素含量为69.2-342mg/100g。李在沙棘籽油等检测谷甾醇,Δ5燕麦甾醇的22种甾醇单体,最高总甾醇是1640.4毫克/100克。这些活性成分使沙棘油具有较高的附加值，为沙棘油的功能产品的开发提供了可能。根据国家食品药品监督管理局的数据，根据沙棘鱼的健康食品原料的数据，63种明确含有22种健康食品的沙棘油成分，在保健品市场中占有一定的份额。

　　脂肪酸是油脂的主要成分，而棕榈烯酸的高含量是果油最重要的特性，与其他油不同。因此，选择棕榈酸酯的总量作为综合评分指标。在生产设备和环境中，有机溶剂提取油的方法是高的，有机溶剂被污染到环境中。超临界CO2流体萃取法具有较高的萃取效率、可回收溶剂和无污染环境，但对压力设备的检测方法相对较高。采用压、离心法提取沙棘油，满足“安全、高效、绿色”的生产要求，是一种简单、稳定的方法。

　　实验结果表明，超临界流体萃取方法SBPO和SBSO局部外用，可显著降低大鼠皮肤烫伤局部红肿、红肿、症状，减少创面的分泌，促进创面愈合，烧伤创面愈合时间明显缩短。本研究为SBPO和SBSO的临床应用提供了实验依据。临床报告，应用沙棘油治疗烧伤，可减轻炎症和疼痛，促进创面愈合，结果与临床报告一致。本实验结果表明，SBPO和SBSO对小鼠皮肤烧伤组织的DNA、RNA、羟脯氨酸和胶原蛋白的含量没有明显的影响。SBPO和SBSO促进烫伤和烧伤创面愈合的机理值得进一步研究。

　　沙棘油提取工艺研究主要以石油产量评价指标进行工艺优化，在脂肪酸组成、生育酚类、类胡萝卜素、植物甾醇、多酚类、类黄酮等因素对工艺条件优化的影响方面，必须综合考虑。和沙棘油的高附加值的体现在它的生物活性成分,不同提取工艺应该进一步研究沙棘油和生物活性成分含量变化的关系和机制,特别是新单体的识别,以沙棘籽油的新结构,高附加值产品的开发提供了理论依据。局部应用种子油或棘皮油、皮肤热水烫伤、氢氧化钠烧伤、皮肤外伤等，对创面愈合有明显的影响。然而，预防伤口感染并不明显。建议适当的抗菌药物在治疗烧伤、烧伤和创面创面时可有效防止伤口感染。

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