宠物滴虫病临床检验及治疗方案

　摘要：为探讨不同治疗方案对患滴虫病宠物的早期预防及治疗提供理论及实验基础，本试验选取两只品种相同，日龄、体重相近，不同性别的犬，通过临床检查、血常规化验、粪便化验以及药敏试验，采用塞拉菌素、米尔贝肟、吡喹酮、伊维菌素、阿苯达唑、阿维菌素、甲硝唑、莫昔克丁，共八类药品分别对患病宠物进行治疗以获得最佳治疗方案。结果表明：甲硝唑治疗效果最佳，是治疗宠物滴虫感染的首选药物，服药时辅助应用VB,VA,VC等可促进疗效，配合益生菌治疗，可减少复发概率。

　关键词滴虫；甲硝唑；治疗

前言

近年来随着饲养宠物的人士越来越多，人们已经能普遍认识到寄生虫类疾病对宠物的危害，尤其是寄生虫类中的人兽共患传染病，也更加注重传染类疾病的预防，但定期到宠物医院驱虫或预防蠕虫类的人并不够多，而滴虫病是明显危害宠物健康以及生长发育的人兽共患病。近些年滴虫病在兽医临床上越来越多见，滴虫病会引起宠物慢性腹泻、营养不良、消瘦、食欲减退以及精神萎靡不振。[17]因此，快速有效地及时治疗滴虫病引起人们的重视。滴虫病是宠物的常见疾病，体内寄生虫影响宠物生长发育，损害动物组织细胞，分泌毒素，甚至病情严重者导致宠物死亡。同时滴虫病也威胁着人类，由于人们对滴虫病了解较少，再加上很多人认为滴虫没有致病性，或感染率极低，一般的宠物医院也只是针对球虫、蛔虫、钩虫进行常规驱虫，对4原虫类的常规驱虫工作做得很少。[17]因此，近年来临床上许多宠物的慢性腹泻都是由原虫引起的。据本人在各类材料中统计，犬的肠滴虫在各类感染犬的寄生虫中，感染率高达3.65%。[17]犬贾滴虫是多鞭毛6鞭毛纲科贾滴虫属，贾滴虫属原虫，寄生于肠道，无论何种犬，均可感染。[13-16]肠滴虫是属于原生动物门鞭毛虫纲的一种肠道寄生原虫。滴虫可在人、猫、犬、啮齿类动物及非人灵长类动物的大肠内生长繁殖，并经粪便排出体外，滴虫可在宿主间直接传染。滴虫在健康的成年猫犬身上可能不会表现感染的外部迹象或症状，但在年幼或免疫力底下的猫犬则多发生慢性、顽固性腹泻，排便频率增加，并含有血液与粘液，粪便呈半固体状并伴有恶臭，肛门水肿，大便失禁，腹部膨大，肠胃胀气。[2-5]近年来，虽然有一些在伴有腹泻的幼犬粪便中发现各类滴虫的报道，但还未见对滴虫临床治疗效果的系统研究。因此，本试验通过对患病犬进行临床诊断，实验室诊断，并以不同方案治疗，观察效果，进行比较分析，以期获得对本病最佳治疗方案，为滴虫病的早期预防及治疗提供理论及实践基础。

　1材料及方法

　　1.1试验材料

　　1.1.1试验动物

收集长春市宠物医院疑似患病动物，具体情况见表1-1。

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患病犬均有食欲不振、腹泻、轻微脱水、体型消瘦、精神萎靡和皮肤松弛等症状，且在经过本次治疗之前未使用任何药品进行治疗，或以肠炎进行治疗未能痊愈。

1.1.2试验药品

生理盐水、饱和盐水、伊红美兰、甲醇、瑞氏染料缓冲液（磷酸二氢钾、蒸馏水按一定比例配制），玉米淀粉、双蒸水、酵母浸出粉、无水葡萄糖、EDTA-KNa抗凝剂、VC、5%葡萄糖、ATP注射液，辅酶A胰蛋白、抗坏血酸、氯化钾、盐酸-L-半胱氨酸、麦芽糖、庆大霉素、青霉素、小牛血清、塞拉菌素（重庆布尔动物药业有限公司）、米尔贝肟（浙江海正动物保健品有限公司）、吡喹酮（佛山市南海东方澳龙制药）、甲硝唑（安徽康牧兽药狗粮有限公司）、莫昔克丁（山东鲁西兽药股份有限公司）、伊维菌素（北京中农华威制药股份有限公司）、阿维菌素（哈尔滨市宏达动物药品厂）、阿苯达唑（山东正牧生物药业有限公司）。

　1.1.3试验仪器

电子分析天平（上海恒平有限公司FA1004）、生物显微镜（邢台慧思科技有限公司HS-391）、恒温培养箱（河北实验室分析仪器制造有限公司DHP-9031）、尼龙网、载玻片、盖玻片、计数器、试管、烧杯、培养皿、全自动血细胞分析仪（济宁市鑫煤矿山有限公司生产HF-3600）。

1.2试验方法

　　1.2.1临床检查

患病宠物精神萎靡，食欲不振，皮肤松弛，两只均出现轻微脱水症状，体型偏瘦，呼吸、脉搏、体温均正常，轻微便血，有贫血症状，鼻镜干燥，不愿走动。[5]

　1.2.2血常规化验

患病宠物静脉采血，EDTA-KNa抗凝，利用全自动血细胞分析仪（济宁市鑫煤矿山有限公司生产）测定血常规，本试验中血常规检查结果，见表1-2

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杆状核与分叶核的比例由染色后镜检通过计数测得并按照比例估计填入上表。

　1.2.3粪便化验

（1）直接涂片法

将试验动物新鲜粪便涂于载玻片正中间，滴加1-2滴生理盐水，混合均匀直至无明显块状，从侧面轻轻盖上载玻片，避免气泡产生。

（2）盐水漂浮法

利用饱和食盐水，由于比重较大，是虫卵漂浮于液体表面，并收集浮于水面虫卵进行镜检，在检查时，收集新鲜粪便约5g左右，将新鲜粪便置于大试管中。注于部分饱和食盐水搅拌均匀，再加饱和食盐水至高于试管口，但未溢出状态。盖上载玻片，静置2h后，拿至显微镜下观察。

（3）粪便沉淀检查法

在试管中放入5g粪便加入100ml清水搅拌，搅拌均匀后，用纱布过滤，将过滤后液体放入另一试管中，静置30min后，将表面形成的液膜倾去，再加入50ml水，搅拌均匀，再静置，重复多次上述内容，直至上层液体清澈透明后，撇去上清液，将沉淀物滴加在载玻片上，滴1滴生理盐水，盖上镜检，注意避免气泡，显微镜下观察，计算滴虫数量。

（4）尼龙网淘洗法

将5g粪便置于烧杯中，加入50ml水，采用金属筛网过滤，一边过滤一边用玻璃棒搅拌，将滤液置于另一烧杯中，将尼龙布筛网浸于盛水器皿，用玻璃棒搅拌粪渣，反复淋洗，重复多次。将网底的粪渣滴加在载玻片上，滴加生理盐水，盖片镜检，置于显微镜下观察，计算滴虫数量。[1]

（5）染色后镜检

将试验动物新鲜粪便涂于载玻片后，稍微加热，加速干燥，滴加瑞氏吉姆萨A液上，使两种液体充分混合后染色5min，以流水冲去染液，防止沉渣沉淀于标本上，干燥后镜检，油镜下可观察到虫体呈梨形或椭圆形，鞭毛数量为4对，腹面有两个吸盘，通过资料查找对比，可确诊为犬滴虫病。[9]

不同方法下测得滴虫数量见下：

方法10倍显微镜下视野范围滴虫平均数量

1.直接涂片法11

2.盐水漂浮法17

3.粪便沉淀检查法18

4.尼龙网淘洗法26

注：本试验滴虫数量比例由瑞氏染色后镜检通过计数测得，并按照比例估计填入上表。

（6）滴虫虫卵形态特征

从本次调查结果发现，直接涂片方法是最为简单的方法，但当虫卵较少时，采用本方法并不能轻易查到虫卵，且杂质较多，难以辨别。因此，当病犬临床检查患病不严重的情况下不宜采用本方法。饱和食盐水漂浮法和沉淀检查法分别是使虫卵在液体中漂浮，在表面采集和使虫卵自然沉淀于水底，再进行收集检查。因此，两种方法差别并不大，显微镜下观察到的虫卵数量也相差不多。尼龙网淘洗法在几种筛查虫卵的方法中相对简便且快速。因此，推荐选用尼龙网淘洗法筛查虫卵用作鉴定。[8]

显微镜下多个较小且呈半透明，活动能力极强的虫体，呈一头稍尖的椭圆形或者球形，有3-4对稍短的鞭毛，一根游离状态下的长鞭毛，分别位于腹部两侧及体躯后侧。当虫体处于兴奋活动状态下，时做突进式运动且在显微镜无法清晰辨认鞭毛数量，体中部位置有两个细长中体。[17-19]

　　2耐药性试验

　　2.1试验培养基的制作

双蒸水1000ml、酵母浸出粉10g、无水葡萄糖5g、胰蛋白20g、抗坏血酸1g、氯化钾1g、盐酸-L-半胱氨酸0.1g、麦芽糖5g。充分搅拌溶解后，分装，灭菌后作基础培养基，置于冰箱4℃保存。使用前先加热到38℃，再加入适量庆大霉素、青霉素以及小牛血清。

　2.2供试虫株

取自本试验中动物新鲜粪便中分离的滴虫虫株接种于培养皿中，静置于38.5℃恒温培养，分离一个滴虫接种到培养液中，28℃进行增殖，待其稳定繁殖十几代后，用于试验，培养液中的活虫数量约为5×104ml。

2.3供试药品

塞拉菌素（重庆布尔动物药业有限公司）、米尔贝肟（浙江海正动物保健品有限公司）、吡喹酮（佛山市南海东方澳龙制药）、甲硝唑（安徽康牧兽药狗粮有限公司）、莫昔克丁（山东鲁西兽药股份有限公司）、伊维菌素（北京中农华威制药股份有限公司）、阿维菌素（哈尔滨市宏达动物药品厂）、阿苯达唑（山东正牧生物药业有限公司）。

将甲硝唑、塞拉菌素、米尔贝肟、吡喹酮、伊维菌素、阿维菌素、阿苯达唑、莫昔克丁以上药品各加蒸馏水2.5mL，制成混悬液或溶液，4℃保存备用。

2.4耐药性试验

将上述滴虫培养液分别加入至25支培养管中，各1ml，前24支培养管分别加入各种药物，最后为空白对照组。[19]将加入药物的培养管和对照组置于38℃恒温箱中培养，并在第2h、第6h分别计算活虫数，经计算后得出相对活虫率。

2.5药效判定标准

相对活虫率＞90%为“-”，表明该药对滴虫基本无效；60%≤相对活虫率＜90%为“+”，表明该药对滴虫有效果，但作用不明显；30%≤相对活虫率＜60%为“++”，表明该药药效良好，具有一定的抑杀疗效；0≤相对活虫率

＜30%为“+++”，表明该药对滴虫非常有效，有很强的抑杀疗效。[19]

8种常见滴虫药物体外杀灭贾第虫的药敏试验结果见表2-1。

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治疗

我们将药敏试验结果良好的药物投入患病犬猫的治疗当中。雌性德国牧羊犬使用吡喹酮片（规格0.1g/片，内服一次量2.5-5.0mg/kg），每次口服1/4片，每隔3d喂一次，连用4次以上。

雄性德国牧羊犬使用甲硝唑（规格0.2g/片，犬猫内服一次量20-25mg/kg），1次/d，连用7d为一个疗程，坚持服药两个疗程。

补液

为避免患病宠物脱水，采取对症方案治疗，补液处方1mlVc注射液，30ml5%葡萄糖注射液，1mlATP注射液，100单位辅酶A针剂。混合后进行静脉滴注，每日一次，连续注射3-5天。观察患病犬脱水恢复情况。[2]

加强营养

治疗期间所有患病宠物一律以干粮为主食，按体重适量添加营养膏（深圳市红瑞生物科技有限公司）增进食欲，补充营养，恢复体能，帮助肠道恢复正常功能。

日常卫生

滴虫的传染性较高，患病宠物的粪便中携带大量滴虫和其虫卵，必须将试验用动物单间隔离，定期消毒，清粪。如果清理不彻底会导致反复感染影响。病兽的食盆和水盆定期清洗消毒，笼具和睡觉用的垫子也务必按时清洗

消毒，尿垫及时更换，直至病愈。滴虫病通过接触也可传播，因此饲养人自身也要加强卫生。

2.6分析与讨论

宠物在患病初期会出现食欲不振，精神萎靡的临床症状，患病中期轻微脱水，体型瘦弱，鼻镜干燥不愿走动，且传染力强。该病在牛、鸽子、动物等动物身上也时有发生。乔立桥等研究表明，牛滴虫病会导致早期胎儿死亡和不育，产犊时间延长，带来巨大的经济损失。张丽等研究表明，褐乌动物感染滴虫后受到应激可致死。杭柏林等研究表明，鸽毛滴虫使鸽子咽喉粘膜呈纽扣状黄色沉着物或溃疡面，是一种需要养殖者重视的常见疾病之一。[21-24]通过本次试验，由血常规化验可知患病宠物红细胞指标、红细胞压积指标和红细胞蛋白指标均减少，但不足以确诊为滴虫病，通过镜检以及观察寄生虫（卵）的形态明确确诊为滴虫病，进行下一步治疗。通过药敏试验可得出阿苯达唑、甲硝唑、吡喹酮和伊维菌素为疗效相对较好药品。在治疗当中，甲硝唑（规格0.2/片内服一次量20-25mg/kg，一次/d）效果最好，且在治疗期间时刻观察宠物状态，及时补液，加强营养，为最佳治疗方案。

3疾病预防

　　3.1杀灭滴虫病

异刺线虫作为组织滴虫病中间宿主，组织滴虫首先通过感染异刺线虫进入其卵巢中，促进线虫其排卵，随卵排出体外。在线虫虫卵内，组织滴虫被充分保护，而且抵抗力增强，可以在外界生存非常久。如果蚯蚓、节肢动物感染了组织滴虫，以其为食的兽类也可能造成感染]。

而异刺线虫本身也是一种常见的寄生虫，寄生于动物的盲肠处对动物消化道造成损伤，所以杀灭狗窝内的异刺线虫是预防动物组织滴虫病爆发的关键，在平时可用盐酸左旋咪唑片按15 mg/kg体重的量对动物进行投药[28]，同时保持养殖区域的干燥清洁，杀灭狗窝内的蚯蚓及节肢动物等，养殖笼舍栅栏离地50cm处可添加混砖结构，并用水泥光滑磨面，以减少蚯蚓等进入动物。

3.2免疫接种

根据文献可得知，动物组织滴虫病暂时无法进行免疫接种。由于组织滴虫体外培养难度较大，现阶段还无法批量生产活苗，且多数兽医工作者认为用活苗免疫接种控制该病的方法不现实，皮下或腹腔注射灭活苗，虽然能刺激机体产生一定的免疫力，但需要在几周之内进行2～3次接种，时间、人力耗费巨大。所以还需要进一步研究简便有效可行的免疫接种方案。

　　3.3狗窝卫生消毒

夏秋季节高温多雨的环境有利于火动物组织滴虫与球虫等繁殖，这也是夏秋季节该病病例增加的原因，所以应保持养殖区域内外环境干燥，保证有充足的光照，加强狗窝通风，合理规划养殖的密度。火动物组织滴虫病作为一种消化道疾病，带有病原的粪便及其所污染的饲养器具、狗粮均可作为该病的传播途径，因此需保持狗窝内的卫生清洁，可用3%氢氧化钠洗刷狗窝地面及其他主要活动场所进行日常消毒。每天提供新鲜洁净的狗粮，可在狗粮中添加多维、氨基酸、大蒜粉、肉桂酸等保健品增强免疫力。及时清除动物粪，粪便按规定堆肥、发酵，同时定期用0.2%的高锰酸钾刷洗食槽、水槽。病死动物的尸体不可随意食用、售卖，应按规定进行焚烧或深埋处理[31]。

　4治疗

　　4.1二甲硝基咪唑

二甲硝基咪唑按45mg/kg给药，拌料投喂，连喂3～5d，之后按20～25mg/kg体重拌料投喂10d。在投喂二甲硝基咪唑的同时还还可以添加维生素A、维生素K、鱼肝油等，能够使受损的肝细胞、肠粘膜尽快恢复，从而起到保肝、促进痊愈的作用。其中维生素A、维生素K用量按每1000mg二甲硝基咪唑添加6万IU维生素A、15mg维生素K3。

　4.2灭滴灵

灭滴灵按病动物0.04g/kg体重拌料投喂3～5d，病情严重者灌服1.25%的灭滴灵[32]。

　4.3中兽药制剂

中兽药有害成分少、副作用低、对动物机体器官损伤较小，且不易产生耐药性，越来越多的学者提倡使用中兽药治疗该病。本病在中兽医疾病分类上属湿热黄疸症。通过实践证明[33]，在病动物狗粮中拌入茵陈蒿散供病动物群食用，治疗效果显著。茵陈蒿散为茵陈、黄栀子、大黄三位药以20:10:.7的比例混匀、粉碎制成。在该方剂中，茵陈清热利湿、退黄利胆，护肝功效极佳；黄栀子味苦性寒，具有凉血解毒、除湿的功效；大黄具有攻积滞、清湿热、泻火凉血等功效。

结论

通过本次试验可得出以下结论：在滴虫的病理检查中，最为准确快捷的方法为，尼龙网淘洗粪便筛出虫卵后染色镜检，且难度较低，便于观察，可明显区分于其他寄生虫疾病。对于已确诊为滴虫病的宠物使用甲硝唑治疗效果

最佳，患病较为严重者，需要及时给予补液，配合少量营养所必需的物质。注意观察病犬精神状态，食欲是否正常，排便状态，确保病犬处于干净卫生，清爽舒适的生活环境，及时清便，以避免交叉感染或重复感染的情况发生。

及时预防是面对滴虫病的最佳方案，犬滴虫病的主要感染途径是经口感染。畜主不经意间宠物就可能误食被包囊污染的狗粮或水，从而感染滴虫病，如果能尽早确诊并就医，病情就能够得到有效地控制，且本病与其它寄生虫病和消化道类疾病有类似症状，不易确诊。因此，在日常生活中，应当加强饲养管理，勤清洗笼具、勤消毒食盒水盒，从而尽早切断传染源，防止感染，当发现犬有类似寄生虫或消化道疾病时，可采取及时隔离的手段，避免感染犬群。若出现血便应立即送至附近的宠物医院排查治疗，确定病因，采取治疗措施，定期驱虫给药，建立健康档案，便于判断病情，促使恢复健康。

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　致谢

在论文完稿之际，请允许我首先向指导老师致以衷心的感谢和敬意。老师知识渊博，治学态度严谨，深度的学术思想和对问题的敏锐的观察力给我留下了非常深刻的印象，让我受益匪浅。在本篇论文的写作过程中，老师在百忙之中对论文过程中的各个环节层层把关，多次审阅修改论文，精心指导解决写作中遇到的问题并给出详细的指导意见，让我在撰写论文过程中分析问题更加准确，行文思路更加清晰流畅。在此，我怀着十分崇敬与真挚的心情，衷心感谢老师对我的无私奉献和亲切关怀。