亲和层析

2.5.1 亲和层析的原理
        亲和层析是一种利用共价连接特异性配体介质的吸附层析，利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相和相应的亲和吸附目标产物特异性结合,使目的物得到分离纯化的方法，像这类特异性的吸附在一定的条件下属于可还原的。这种结合与抗原抗体的结合是类似的，因为其高选择性、分离性能和较大的载量,能经过很简单的处理分离纯化生物大分子，在保持蛋白质这类大分子的活性同时，得到高纯度的目的蛋白产物。
2.5.2 亲和层析的分类
       亲和层析一般分为特异性配体亲和层析和通用性配体亲和层析。根据配体与生物大分子之间相互作用体系差异，可以将亲和层析分为生物亲和层析、免疫亲和层析、金属离子亲和层析和拟生物亲和层析四大类。
（1） 生物亲和层析
       利用大自然原本就有的生物相互的特异性能产生的亲和作用，一般都拥有很小的适配性，因其独特性在自然界是单一少量存在的，常见熟悉的物质有抗原-抗体等。
（2）免疫亲和层析
       用样品中抗原（抗体）作为配体，亲和吸附抗体（抗原）的分离技术。免疫亲和层析更多的运用于单克隆抗体中蛋白的分离纯化。这种方法得到的目标产物活性，回收率比较高。陈登鸿曾用单克隆抗体亲和层析技术一步纯化重组人体生长激素；王海龄,钟峻等学者用免疫亲和层析法研制蛋白C特异单克隆抗体。
（3）金属离子亲和层析
       一种用金属离子的络合物或形成螯合物的能力吸附蛋白质的层析技术。一般在层析技术中运用的离子有锌、铜、镍、钴离子，一般的螯和配体有亚氨基二醋酸、三乙二胺，目的蛋白与金属离子的结合是对目标蛋白进行分离纯化的根据。金属螯和亲和层析技术包括装柱，加样，洗脱，柱再生四个步骤。其操作过程中，配体与载体的选择尤其重要。与离子交换层析技术在一定程度上有共同相似之处。相比其它亲和层析技术，金属离子亲和层析成本相对较低，活性好等优点。杨渐、余昌喜等学者在2013年探索金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白中的应用时得出钴金属亲和层析在分离纯化hIGF-1融合蛋白时有很好的可操作性和纯化效果，是可用于实际的蛋白工艺技术。
（4） 拟生物亲和层析
       利用部分生物分子间相互作用，模拟生物分子的结构和性质，以人工合成的配基为固定相吸附目的蛋白的亲和层析技术。在很大程度上拟生物与自然界生物是相同的。拟生物是人类制造的，生物是大自然中原本就存有的。染料配基,例如三嗪或三苯甲烷化合物,可以运用共价键稳稳地连接到亲和载体上。

2.5.3 亲和层析特点
（1） 亲和层析优点
       亲和层析用于生产中时，其有上样量大，纯化过程简单、迅速，操作方便，分离效率高，能保持被分离物质的活性等优点。像蛋白质类生物大分子在工艺进行中不稳定，高温，PH都会导致其失活，用亲和层析技术来分离提纯蛋白质就相对容易进行，也更容易保持其稳定性和活性。
（2） 亲和层析缺点
       亲和层析在使用时有其特定的载体，而这个载体不是对每一种需要分离的大分子物质都适用的，这就要求我们根据要分离的物质找到其合适的配体，并制作出可使用的固相载体。另外在洗脱时，层析介质上的配基有掉进产品中的可能，会对目的物造成一定的污染。亲和层析填料成本比较昂贵。
2.5.4 配体和载体的选择
（1） 配体的选择
       选择配基时需要考虑以下一些因素，配基对蛋白质的独特性、配基与蛋白质组合的可逆性、配基对蛋白质的亲和性、配基大小等，配基的选择是亲和层析技术中的核心部分。每一种待分离纯化的蛋白质都有其对应的配基。
（2） 载体的选择
        实验中可使用的载体要对蛋白质目的物没有特异性吸附，有充足的功能性基团，不会产生疏水性并且不溶于水，不易变化的物化特性，合适的机械性强度和大小一致性，还要是孔径大的多孔性材料。载体的选择在亲和层析中也是尤为重要的，是成功与否的关键。
2.5.5 亲和层析应用
       亲和层析在蛋白质组学中用于测定和鉴定蛋白质的成分和结构；在快速发展的生物制药行业用来分离纯化目标蛋白，定量测定蛋白质含量；对于生物之间的相互作用，亲和层析也可以进行研究。目前，亲和层析不仅运用于制药行业，其在生物学，医学，食品等方面也有重要作用，推动了科学的脚步。
2.5.6 亲和层析研究进展
       亲和层析最初用于蛋白质和酶的分离纯化上，后来在各界学者的不断创新不断研究中慢慢发展，目前，亲和层析技术已经渗透生物学，广泛用于制药工业中生物分子的分离和纯化。比较于另外的蛋白质分离纯化方法，亲和层析有高成品率、高精度、能保留生物大分子活性等优点，但是使用亲和技术也有一些缺点，主要是载体的价格比较昂贵，机械强度性比较低，配基的制备相对困难等，所以想克服存在的缺点人们需要不断地进行研究。 王莉，陈勇等学者在研究亲和层析时，发现在运用时亲和层析可以与分子生物学相结合，成为一种新的技术手段。