中药复方对鸡传染性喉气管炎的疗效观察

　摘要：方法：在本试验中，选取8日龄海兰褐蛋公雏共100只，随机划分至5组内，其中1组为模型对照组、2组为空白对照组、3-5组依次为低、中与高剂量的中药复方组。攻毒的为1、3、4、5组，不攻毒的为2组。完成时长为48小时的攻毒操作后，分别将低、中与高剂量组的复方中药添加至3、4、5组内，不给药的为1组与2组。连续给药6d，分别于用药后2d、4d、6d、8d观察临床症状，统计治愈率。针对翅静脉处加以采血，将血清分离出来，进行SOD活力、MDA及ALT含量的测量，与此同时，完成对抗体效价的测定。结果显示：相较于空白组而言，模型组的死亡率显著提升，MDA、ALT含量有所提升（P≤0.05），而SOD活性则有所下降（P≤0.05），抗体效价水平改变（P≤0.05），说明给鸡攻毒后，各组鸡都感染了鸡传染性喉气管炎病毒。用药后，对比模型组，低剂量组具有更低的MDA含量（P≥0.05），且具有相对较高的SOD活性（P≥0.05）。其余用药各组的SOD活性和抗体水平相较于模型组升高（P≤0.05），MDA、ALT含量降低（P≤0.05）。结论自拟中药复方能够有效治疗鸡传染性喉气管炎，本次实验中给药组产生了明显得免疫效果，高剂量组对于鸡传染性喉气管炎治疗效果优于中低剂量组。

　关键词：鸡传染性喉气管炎；中药复方；ALT

1前言

鸡传染性喉气管炎（ILT）该疾病属于急性、接触性上呼吸道传染病的一种，传染性喉气管炎病毒（ILTV）为其主要病因。该疾病的鳞状症状十分鲜明，大多为湿性啰音与流涕现象，此后逐渐开始出现气喘于咳嗽的现象，随着病情的加重，呼吸愈加困难，甚至会将血样黏液[1]咳出。鸡传染性喉气管炎病毒具有较快的传播速度，痊愈后的带毒鸡与病鸡成为了传染源，且康复鸡在治愈的两年内，均处于带毒状态，对健康鸡群造成长时间的感染，且会导致环境受到病毒污染[2]。一旦传染性喉气管炎被各个年龄的鸡不同年龄的鸡感染后，受到不同的养殖条件u鸡群状态的影响，其发病率和致死率存在很大差异,发病率可达90%～100%,致死率通常5%～50%[3]。

　1.1国内外鸡传染性喉气管炎研究的进展

ILT1925年由May等首次在X罗德岛发现以来，已在世界上广泛流行[4]。ILT是世界主要养禽国家重点防控的禽类传染病之一，根据1999年颁布的《国际动物卫生法典》可知，该疾病属于B类疫病的一种[5]。该病自1996年起，爆发于我国邯郸、邢台等区域，具有十分鲜明的地方性流行特征，未进行免疫接种的鸡群具有十分严重的发病现象，给当地养禽业造成不可估量的损失[6]。国内外大量学者均针对该疾病展开了大量的研究，并提出了相应的预防、诊断等措施，明确其流行特点，并提供了针对性的治疗措施，在病毒的分离、检测、鉴定和基因表达方面做出了详细报道，不再过多赘述。

　1.2鸡传染性喉气管炎中药防治研究进展

鸡传染性喉气管炎病位在肺，属于温热病中的风温病。肺属金，主气，对呼吸产生较大影响，主宣发，外合皮毛，主肃降，通调水道，在鼻处开窍。该病的形成往往是由于风热（火、热毒）之邪侵染机体所致[7]。按照中兽医学理论，ILT、IB均系疫毒内侵所致，可将其视为温热病的一种，最为常见的临床现象就是热邪壅肺的气分证侯。热邪壅肺，清宜失司，气逆痰壅，因而导致患者往往具有气喘、咳嗽等病症，由于该疾病的实际属性为热，因而肺部为其主要的发病区域。在治疗的过程中，以清热解毒、止咳化痰等药效作为入手点[8]。根据国外的研究成果可知，以聚合酶链反应（PCR)技术和对自由基的清除为其主要研究方向。

近年来，鉴于导致鸡传染性喉气管炎的发病的原因相对复杂，为了针对这一疾病予以有效防治，往往采取中药和加强饲养管理方法的综合方法，且效果十分显著。刘振宇[9]等人用金银花、板蓝根、蒲公英、杏仁、白芷、贝母、鱼腥草、甘草、黄芩、连翘、地龙、射干以及桔梗组成的中药粉并混合于食物中，有效的提高了治愈率，降低了死亡率。牛建荣[10]等以板蓝根、黄连、黄芩等组方,运用现代制药技术,精制而成的“菌毒清”制剂对人工感染鸡传染性喉气管炎的疗效进行观察，亦取得了不错的效果。程晶晶[11]等在“鸡传染性喉气管炎病毒受到黄芪麻杏石甘汤的作用下，在机体内的增殖变化情况”一文中也证明了中药方剂对鸡传喉有一定的治疗意义。

中药制剂的少残留，低毒副作用亦是近年来的研究热点。吴琼[12]等对鸡传染性喉气管炎的防治过程中提出中药汤剂能改变病鸡体内局部微循环，促进炎症吸收，消除喉部水肿所导致的炎症等问题，且中药无毒副作用，对病体损伤较少。安芳芳[13]等从中西医结合的方向,对本病的病原特征、流行病学特点、临床症状、诊断、防治等方面进行综述，表明从中西医不同的诊疗方式来看，中医试剂副作用小，能够有效缓解鸡的喉部和气管受损现象。

　1.3本试验的研究目的意义

本试验根据中兽医理论筛选组成纯中药制剂，通过观察病鸡临床症状和测定血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和血清抗体效价，探讨该方剂对雏鸡传染性喉气管炎的治疗效果，针对中药试剂的和实际量予以筛选，将生物体新陈代谢时存在的有害物质予以清除，大大提升生物体的新陈代谢能力，其具有着直观重要的意义。

2材料与方法

　　2.1实验材料

中药复方由射干、麻黄、杏仁、桔皮、板蓝根、连翘、鱼腥草、贝母、贯众组成，由北京同仁堂有限责任公司购买；ILTV标准北京株E3（含毒0.2g），购自中国兽医药品监察所；在定州鸡场采购100羽1日龄健康海兰褐蛋公雏；自梅里亚维通实验动物技术有限公司采购了SPF种蛋；在南京生物工程研究所完成了SOD、MDA、ALT试剂盒的采购；在广州正升生物科技有限公司采购了鸡传喉抗体ELISA试剂盒。

　2.2试验方法

　　2.2.1人工造模

ILTV标准北京株E3用前复壮，以1：1000的比例将种毒予以稀释，充分借助毛尿囊膜，在10日龄鸡胚上进行接种，每胚0.1ml。收取鸡胚尿囊膜48h，以备试验使用。

选择1日龄SPF海兰褐公雏100只，供试验用。所有试验鸡在试验开始前饲喂基础饲料，适应1周，8日龄时，对第1、3、4、5组每只鸡进行0.2mL的ILTV强毒液气管注射，2组不攻毒作为空白对照组，观察试验鸡的临床症状，以出现咳嗽、气喘，或咳出带血渗出物，或出现气管罗音等呼吸困难症状为造模成功[14]。

2.2.2复方中药液制备

精准称取射干、麻黄、杏仁、桔皮、连翘、鱼腥草、贝母与贯众各100g，并取200g板蓝根，水煎取汁，浓缩成浓度为1g/mL的药液。

　2.2.3实验分组

在本试验中，选取8日龄海兰褐蛋公雏共100只，随机划分至5组内，其中1组为模型对照组、2组为空白对照组、3-5组依次为低、中与高剂量的中药复方组（剂量依次为20g/L、30g/L、40g/L）。

8日龄时，1、3、4、5组攻毒，2组不攻毒。攻毒48h后，除1组和2组外，3、4、5组分别给予低、中、高剂量组的复方中药，连续给药6日，每日给药1次。

2.3测定方法

在给药后第2、4、6、8天观察临床症状，每组随机选取10只鸡翅静脉采血，分离血清3500 rmp，4ºC，离心10 min，严格按照试剂盒说明书的方法测定SOD、MDA、ALT指标和抗体效价水平。

3结果与分析

　　3.1临床症状

1组、3组、4组、5组于攻毒48 h后，各组鸡逐渐开始现象病症，并迅速传染至整个鸡群，症状十分鲜明，精神状态不安、嗜睡或沉抑，惧怕寒冷天气；羽毛杂乱不堪、翅膀低垂、常处于呆立状态；咳喘、甩头、喷嚏等现象频频发生，具有显著的气管啰音等症状。连续给药6d后，3组、4组、5组鸡临床症状减轻或消失，5组效果最为明显。

复方中药对鸡传染性喉气管炎的影响：

1组、3组、4组、5组于攻毒后，死亡数率分别是50%、20%、10%、10%，治愈率分别是80%、90%、90%，说明中药复方对传染性喉气管炎有明显的治疗作用，治疗效果最佳的为高剂量组，如表1所示。

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　3.2复方中药对血浆SOD活性的影响

2、4、6、8天进行血浆SOD活性检测，结果如表3-2所示。治疗8天内，相较于空白对照组而言，无论是给药组，还是模型对照组，其SOD活性相对较小，且具有显著性差异（P≤0.05）。经过2、4天的给药后，相较于模型组而言，给药组的SOD活性显著提升，且随着试剂剂量的不断提升，SOD活性也得以显著升高，而模型组与中低剂量组之间并未存在明显差异（P＞0.05），但相较于模型组而言，高剂量组相对较高，且具有显著差异（P≤0.05）。经过6、8天的给药后，相较于模型组而言，给药组的SOD活性名下更高（P≤0.05），且随着试剂剂量的不断提升，SOD活性也得以显著升高。以上结果说明复方中药对鸡传染性喉气管炎有治疗效果，效果与复方中药计量成正比。

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　3.3复方中药对MDA含量的影响

由表3-3可知，给药第2天，模型对照组MDA含量即有所上升，且给药八天内，均与空白对照组差异显著（P≤0.05）。在为时八天的给药期内，相对于模型对照组而言，各个给药组的MDA含量均处于较低状态。自给药第四天其，相较于模型对照组而言，中高剂量组的MDA含量处于较低水平（P≤0.05），尽管低剂量组也具有相对较低的MDA含量，但并不具有显著差异（P＞0.05）。给药后，且随着试剂剂量的不断提升，给药组的MDA含量也得以显著下降，高、中剂量组MDA测定值均低于低剂量组，说明高、中剂量组对鸡传染性喉气管炎的治疗效果高于低剂量组。

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　3.4血浆ALT含量

给药后，2、4、6、8天进行血浆ALT含量检测，结果见表4。随着给药天数的增加，模型对照组及给药组血清转氨酶ALT活性增加，空白对照组无明显变化趋势。给药第二天，相较于模型对照组而言，中高剂量组的ALT活性相对更低（P≤0.05），尽管低剂量组也具有相对较低的ALT活性，但并不具有显著差异（P＞0.05）。经过4-8天的给药后，相较于模型对照组的ALT活性而言，给药组明显处于较低水平（P≤0.05）。给药期间内，给药组中试验鸡血清转氨酶ALT活性随试剂剂量的增加而显著降低。

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　3.5抗体效价测定

如表3-5所示，在给药的8天中对模型对照组、空白对照组及高剂量组的抗体效价测定如表5所示。给药8天内，模型对照组低于于给药组抗体效价测定结果（P≤0.05），抗体效价随剂量的增加而增加，其中高剂量组的抗体效价最高，说明高剂量组的治疗效果最好。

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4讨论

　　4.1自拟中药复方对ILT的治疗效果

鸡传染性喉气管炎（ILT）是由传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起鸡的一种急性呼吸道传染病，目前已有临床诊断资料表明ILT对肝功能有损伤[15]，本实验通根据中药具有主疏泄，喜条达，恶抑郁等特性组方，为中药治疗ILT提供新思路。

本实验利用雏鸡感染ILT作为模型，使用自拟中药复方制剂进行治疗，根据本实验结果，给人工攻毒的雏鸡混饮3种浓度的中药汤剂后，该病的死亡率与致病率等指标都存在一定不同，具有最佳疗效的为中、高剂量组，有效的将死亡率降至10%；比模型组的死亡率降低40%，表明本药剂能有效治愈鸡传染性喉气管炎。按治疗浓度给予本药，每天自由饮服，连服8天，可有效治愈鸡传染性喉气管炎。

从治疗效果看，自拟中药复方对ILT有很好的疗效，各给药组的各项指标均优于模型对照组。之所以产生这一现象，根据笔者推测，是剂中存在的麻黄[16]的药效得以充分发挥，该味药材具有解毒、豁痰，将难以呼吸等现象予以消除，此外，也可能是抗病毒作用被连翘、板蓝根、鱼腥草等药材发挥[17]，将鸡体内的多种病毒予以杀灭，从而对ILT的生长与繁殖产生一定的抑制作用，迅速恢复组织的正常运转，亦或是上述种种药物共同发挥药效的成果，彼此间相辅相成，完成治疗的目的，仍有待深入探究。

　4.2自拟方剂对ILT血清中氧化指标的影响

机体通常产生大量的氧化还原反应，此机体存在氧化还原循环中，在机体内最常见的氧化物如下：氧化氢（H2O2）、羟基自由基（-OH）等。在机体内，往往具有较为全面的酶与非酶抗氧化系统，以除去体内活性氧的过量，因此，从生理角度来看，机体内存在的自由基氧气浓度始终处于较低水平，且处于均衡状态，既不会对人体产生任何威胁，还会促进细胞的增值，对白细胞与噬菌体产生刺激作用，将细菌杀死，从而将炎症予以清除，将毒物进行有效分解。若身体中存在过量的自由氧基，将会导致细胞结构被破坏，发生脂质过氧化现象，从而生成以丙二醛为例的脂质过氧化物，对正常的代谢活动产生较大干扰，导致机体的免疫力大幅下降，饱受多种疾病的摧残[18]。

在生物体系中，存在着至关重要的一位成员，即为超氧化物歧化酶（SOD），在微生物、动植物体内得以广泛分布。它能够催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢，在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用，与很多疾病的发生、发展密不可分[19]。

在机体内存在的氧自由基攻击生物膜内，具有一种多不饱和脂肪酸，即为丙二醛(MDA)，可将脂质过氧化物予以形成，针对MDA的含量加以检测，该结果可将机体内脂质过氧化水平予以感喟，可根据该指标间接了解细胞损伤的程度[20]。

SOD、MDA活性是生物体内重要的抗氧化指标。何永明[21]等人曾使用SOD、MDA血液指标探究中药合剂对人工诱发传染性喉气管炎的治疗效果。在本次实验中，针对人工感染的雏鸡血清进行检测，明确其中的SOD、MDA含量变化情况，可知由于雏鸡感染了ILT，大量消耗体内的抗氧化酶，引起SOD活性活性下降，鸡体抗氧化能力减弱，引起细胞损伤，生物膜变性，细胞代谢及功能障碍，导致机体开始现象病症。而ILT感染与抗氧化二者的相关性，在MDA的变化下得以证明。当ILT被雏鸡感染后，相较于空白组而言，对照组的MDA含量相对较高，且满足显著性差异（P≤0.05）。意味着一旦机体感染了ILT，就会大大降低机体内的抗氧化物酶活性，与此同时，聚集大量的氧自由基，增强了脂质过氧化反应力度，导致机体内存在大量累积的脂质过氧化物，血清内的MDA的含量显著提升，导致机体被侵害程度进一步加深。

已有实验表明鸡传喉病毒对肝细胞亦有一定的损害作用。谷丙转氨酶（ALT）主要存在于各种细胞中，以肝细胞最为突出，相较于血液而言，肝脏内存在的转氨酶含量高达100倍。一旦机体具有病毒性肝炎的症状时，血液中的ALT得以大量释放，并以此作为指标，判断机体是否发生了病毒性肝炎、中毒性肝炎。一旦肝脏存在病变现象时，大大提升了干细胞中存在的谷丙转氨酶（ALT）活性，使血清中存在的ALT含量得以显著提升。所以，无论是在医学领域，还是在宠物临床领域，在针对肝脏功能进行检测时，血清中的ALT含量作为必不可少的一项指标[22]。本次实验中，雏鸡感染ILT后，血清ALT含量，模型对照组显著高于空白对照组，且差异显著（P≤0.05），说明ILT确实对肝细胞有一定的损害作用。

结果显示：相较于空白组而言，模型组的MDA、ALT含量有所提升（P≤0.05），而SOD活性则有所下降（P≤0.05），抗体效价水平发生变化（P≤0.05）。意味着针对鸡采取攻毒操作后，除却空白对照组的鸡，各组鸡都感染了鸡传染性喉气管炎病毒。用药后，用药各组的SOD活性和抗体水平升高，MDA、ALT含量降低，结果表明本药剂对清除血液中的有害物质，修复受损细胞作用，且作用与中药剂量呈正相关，且高剂量中药的效果最好。这于上述文献结果相一致。

　5结束语

通过对攻毒鸡的临床症状表明成功建立了模型。

用药组血清SOD活力、ALT含量、治愈率远高于对照组，并于健康组差异显著；同时血清MDA含量下降；抗体效价实验显示用药组病鸡产生抗体能力较强，表明自拟中药复方有治疗效果。

根据结果可知，治疗鸡传染性喉气管炎具有最佳疗效的剂量为40g/L，然而并未证明高剂量中药试剂对病鸡是否毒害作用，临床建议使用剂量为30g/L(中剂量组）。

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　致谢

首先特别感谢我的老师，在老师的悉心指导下，我完成了本论文的分析。在这么长的写作论文时间里，我的指导老师给了我很大的帮助，从最初课题的选择、论文的开题、论文的中期检查到最后论文的完成，老师严谨科学的治学态度深深地影响着我。老师始终孜孜不倦，耐心指导，在多次的论文修改过程中，给予我专业的指导。能够完成这篇论文，虽然辛苦，但很充实，这篇文章凝聚着指导老师的心血、同学们的帮助和支持，在此向我的论文指导老师致以最衷心的感谢！