沙门氏菌的检测

摘要

沙门氏菌是监测食品卫生的重要指示菌。平时生活中，如果食品被沙门氏菌污染，说明进行检查的这份食品是不健康，不可以食用的。目前，传统的沙门氏菌检测存在较多缺点，例如像是操作麻烦、检测时间耗费时间长、结果判断误差不低。因此，有必要利用现代生物技术(例如像是试剂盒、试剂条等)，通过现代信息手段(像是一些便携式的或者可以简单操作的仪器)对常规检测的生化反应结果进行处理，可以帮助检验人员克服主观因素造成检测结果判断失误，减少检验误差，提高细菌鉴定结果的准确性。

论文主要利用文献研究法和现在形势发展相结合的方式，通过分析现有的沙门氏菌快速检测方法酶联免疫吸附法、聚合酶链反应、环介导等温扩增和基于蛋白质的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法，找出现有检测方法的利弊，提出现存在的问题以及未来的发展趋势。

　关键词:沙门氏菌；检测技术；免疫学技术；分子生物检测方法；PCR方法

　1前言

平时我们实际生活里如果是因为由于各种类型的沙门氏菌导致我们不同形式的人、牲口或者野生动物得病的病源统称为沙门氏菌。当然如果是被沙门氏菌传染者或带菌者粪便污染的食品也会导致我们发生食品中毒的事情出现。据统计，在全世界各类细菌性食品中毒事件中，沙门氏菌引起的食品中毒位居榜首位置。我国内陆地区食品中毒原因中因为沙门氏菌的原因也是为第一位，但是目前沙门氏菌的检测各大检测机构仍然还是继续使用国标的检测方法，国标方法包括细菌培养、生化培养以及血清学鉴定实验包括分离细菌纯化鉴定等程序，这些步骤检测下来至少需3天到8天的时间，甚至更长时间，不但耗费大量的人力物力，还有难以运用于快速简单的检测要求的缺点；缺乏特异性也是这些方法的一个共同特点，在应用上受到很多限制，同时操作技术上也比较麻烦，不方便操作。所以沙门氏菌的快速检测，已经成为当今世界沙门氏菌检测的主流。

　2沙门氏菌快速检测技术现状发展情况

(1)李伟昊、张会彦、刘卫华、李岩、李英军、张伟研究出的方法如下表所示：

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虽然此方法与改进前方法的效果是一样的，但是这种方法可以大大降低了检测费用的成本。FTA滤膜主要是通过吸附菌体，使得菌体发生裂解反应达到可以将DNA吸附在滤膜上的作用，然后用10%SDS把干燥后的FTA滤膜进行煮沸10min，这样做的目的不但可以沉没蛋白质，还可以核酸酶性质发生变化，和原来不一样了，同时也可以保证菌体裂解反应的更加充分。使用FTA滤膜的方法不但可以让从肉中提取污染的沙门氏菌模板的方法变得更加快速、简单，而且花的钱还更加少。用FTA滤膜用于检测肉中沙门氏菌方法可以在6h内完成对肉中沙门氏菌的检测。

(2)袁伟、唐善虎、岑璐伽、李雪、陈诺、罗薇研究PCR法关于肉鸭屠宰环节中沙门氏菌严重污染的一个重要原因之一，主要内容如下表：

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因此通过PCR法可以为监控为生产加工链环节提供有效地数据支撑，从而发现改善生产加工链的方向。

(3)程洁萍、谭翰清、朱颖梅通过研究沙门氏菌的TaqMan探针的实时荧光PCR方法的主要内容如下表：

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通过上述方法不但提高食品安全风险监测体系的准确性，也更加快速，达到及时预警的作用，保障食品安全，降低对婴幼儿的健康妨害。

(4)高琳、王淞、刘国红、温华蔚、王禹、刘掘茫、张霞具体研究内容已归类总结如下表所示：

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(5)王羽、王贞强、张伟研究利用LAMP方法进行沙门氏菌的检测，主要内容概括如下表格：

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(6)刘慧玲、涂晓波、吕敬章、黄欣迪、吴绍精、洪小柳、葛丽雅、黄李华、张恒研究的关键内容总结归纳如下表所示:

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(7)张体银、黄晓蓉、郑晶、邵碧英、黄嫦娇、陈彬、林杰、汤敏研究出关于沙门氏菌快速检测的内容总结如下表格:

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(8)王瑾、林丽萍、郜彦彦、吴国平研究开发的方法内容如下表：

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3现有沙门氏菌快速检测技术的利弊分析

全球范围内最为重要的几种食源性致病菌之一是沙门氏菌，发病率在细菌性食源性疾病中所占比例为第一位的是沙门氏菌，不良影响是卫生保健系统造成了十分重大的经济负担。所以沙门氏菌快速检测技术的发展进步也成为了预防监控食源性疾病(沙门氏菌)最重要的环节的最重要的一环，但是快速检测技术性能需要突破的指标主要是

如何收缩检测所需时间与灵敏度的提高。目前主要有基于免疫学的快速检测方法(名称为酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA))、基于分子生物学的聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)、环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)和基于蛋白质的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)四大类方法已经运用到多种食品病原微生物的检测中，其中以敏感、快速、简便的优点备受关注。

这四种方法的利弊关系主要是：

(1)ELISA方法的优点是准确，但是需要花费的价格比较高，还有灵敏度低下的缺点；

(2)PCR方法虽然成本较高且检出限低,但是检测快速而且灵敏度高；

(3)LAMP方法的缺点是需要在恒温条件下进行检测，优点是具备用时短、成本低廉、方便、快速、高灵敏性和高特异性等优点，可以应用于到地方机构等部门或公司快速检测，用有很好的市场应用前景；

(4)MALDI-TOFMS方法优点在于检测时间短,操作简单,准确率高检出限低但需要完善的细菌库进行比对。

　4沙门氏菌快速检测技术未来发展趋势分析

许多研究表明，食品有主要有两类影响沙门氏菌检测，这两类也严重影响沙门氏菌快速检测技术的发展，主要体现如下表收示：

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所以目前很多的快速检测技术都有，这一环节大大地拖延了检测的时间。通过减少预增菌环节的检测时间，可以大大地降低沙门氏菌的总体的检测时间，达到加快沙门氏菌检测最终结果的确定时间。

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我认为通过比较现有沙门氏菌检测技术，像是含有内控的荧光定量PCR方法是克服常规PCR和普通荧光定额PCR的缺点,它的优点还保留了操作简单和定量准确性高，但是PCR方法的缺点是仍然是成本高的问题，因此它的未来发展趋势仍然是需要优化成本，PCR检测方法成本较高，是市场上不能广泛应用的一大重大缺点，所以我认为PCR方法主要能够在保证检测快速、灵敏度高，同时又能节约成本的前提下，也能广泛应用于各种环境检测，。PCR检测方法也是目前最多人进行研究的检测方法，PCR检测方法也在不断的被优化改善，我相信未来PCR检测方法只要在成本上进行控制，降低成本，未来是沙门氏菌快速检测方法的主流一定是PCR检测方法。

ELISA检测方法虽然准确，但该检测方法灵敏度低下并且花费的价格还是比较高的，想要在市场上广泛应用，相比于PCR检测方法，ELISA检测方法除了需要解决成本高的问题，还需要在灵敏度和特异性的层面上继续优化和改善，只有在保证准确度、特异性强和灵敏度的前提下，ELISA检测方法在具有市场竞争力，所以未来ELISA检测方法的研究前景还很大。

沙门氏菌快速检测还有一种方法是选择LAMP法检测食品中沙门氏菌,LAMP方法的优点是对实验仪器要求低,灵敏度高且易操作，方便检测人员或监控人员快速掌握该检测方法。

同时我也坚信未来在建立了完善的细菌库的情况下,MALDI-TOFMS方法也会是一种合适的沙门氏菌快速检测方法，但是细菌库的完善需要在国家和各大检测机构的共同推动下，才能建立出一个较为完善的细菌库，且该细菌库也需要不断的进行细菌的种类的增加和补充，才能保证使用MALDI-TOFMS方法检测沙门氏菌的准确度高且准确。

　5结论

相比于传统(国家标准)检测方法，目前沙门氏菌的快速检测方法的优点主要是降低了需要检测大量样本的食品的检测工作量、卫生和兽医部门的实验室的检测工作量，但是在PCR方法、LAMP方法、ELISA方法以及MALDI-TOFMS方法等方法上，每一种方法都存在一定的优缺点，例如ELISA方法虽然能避免假阴性情况的出现(检测结果不准确)，但是PCR方法的灵敏度和特异性比ELISA方法的要好，PCR方法的优点是符合快速、操作简单的要求，但它的缺点又有容易发生交叉污染和假阳性高的情况。MALDI-TOFMS检测方法虽然快速、简便,但需要在有完善的细菌库的前提下才能实现。

因此，在扩大其检测适用范围、克服假阳性和假阴性的反应的前提下，要使快速检测技术广泛应用，还需要考虑解决市场生产实际应用过程中容易出现的可能性和一些潜在的公共卫生等问题，并且实现相互间的联用技术也是十分重要的。

在发展快速检测技术的前提下，不能一味的去放弃传统(国标方法)方法上要求的分离培养方法的应用，有一些涉及到需要最终结果的样品，它需要进行一些分离培养的结果，所以分离培养方法也是不可忽视的。

总之，我相信随着现代科学的发展，不仅仅是免疫学和分子微生物学的发展，未来沙门氏菌快速检测技术一定会向着快捷、灵敏度高、经济实惠和特异性强的方向不断进行改进和发展。

　参考文献

[1]李伟昊，张会彦，刘卫华，李岩，李英军，张伟.FTA滤膜用于PCR检测肉中的沙门氏菌.河北农业大学食品科技学院，河北保定071001

[2]袁伟，唐善虎，岑璐伽，李雪，陈诺，罗薇.PCR法检测肉鸭屠宰加工生产链中沙门氏菌的污染.袁伟，唐善虎，岑璐伽，李雪，陈诺，罗薇.西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041

[3]程洁萍，谭翰清，朱颖梅.TaqMan探针实时荧光PCR快速检测奶粉中沙门氏菌的研究.肇庆市疾病预防控制中心，广东肇庆526060

[4]高琳,王淞,刘国红,温华蔚,王禹,刘掘茫,张霞.等温扩增技术在食品中沙门氏菌检测中的应用.天津出入境检验检疫局,天津300461

[5]王羽，王贞强，张伟.环介导等温扩增技术检测肉及肉制品中的沙门氏菌.河北农业大学食品科技学院，河北保定071000

[6]刘慧玲1,2,涂晓波1,2,吕敬章1,2,黄欣迪1,2,吴绍精1，洪小柳1,2,葛丽雅1,2,黄李华1,2,张恒1,2.基于纳米探针检测食源性肠炎沙门氏菌技术初探.(1.深圳市检验检疫科学研究院,深圳518010;2.深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心,深圳518045)

[7]张体银，黄晓蓉，郑晶，邵碧英，黄嫦娇，陈彬，林杰，汤敏英.免疫捕捉-通用引物PCR检测食品中沙门氏菌.福建出入境检验检疫局，福建福州350001

[8]王瑾，林丽萍，郜彦彦，吴国平.实时荧光环介导等温扩增快速检测鸡肉中沙门氏菌.西农业大学食品科学与工程学院，南昌市农产品加工与质量控制重点实验室，江西南昌330045

[9]刘胜贵1,魏麟1,2.应用PCR技术检测猪肉中沙门氏菌的研究.(1.湖南怀化学院生物系，湖南怀化418008；2.云南省生物技术与生物多样性人才培养基地，云南昆明650201)

[10]罗荣,任秀,崔生辉.食品中沙门氏菌快速检测技术研究希望.中国食品药品检定研究院,北京100050[11]封莉，黄继超，刘欣，黄明，周光宏.食源性致病菌快速检测技术研究希望.南京农业大学国家肉品质量安全控制工程技术研究中心，江苏南京210095

　致谢

在论文完成之际，我首先我要感谢的就是我的论文指导老师，在论文筹备的阶段导师就对我们做出要求，从论文的开题到论文初稿的修改直至论文定稿阶段，我的导师都会不厌其烦的给我的论文提出专业性的意见，为我研究论文的方向做出指导，在论文撰写的过程中也会及时得对我遇到的专业方面的难题给予一定的指点和帮助，提出了许多对我有益的改善性意见。也真心的感谢每一位教师的谆谆教诲，给予了我们各种专业的知识和不断努力的力量。