1前言
1.1何首乌的概述
何首乌，是一种蓼科植物中药何首乌（Polygonum multiflo－rum Thunb.）的干燥块根，含有多种药理活性成分，例如二苯乙烯苷、蒽醌类衍生物和软磷脂等，是享誉中外、延用千年的知名中药。两广地区和湖北省是何首乌主要源产地。何首乌多为块状或不规则纺锤形，呈红棕色或红褐色，具有不规则的纵向横沟，表面不平整，有许多褶皱，整体沉重、坚实，不容易破碎，截断面的颜色为浅红色或浅黄褐色，有“云锦”图案，其味道略带苦味，些许回甘、涩口但性温。用药有生何首乌与制何首乌之分，秋季末尾等到何首乌的的茎和叶都枯萎的时候，或者在第二年的年尾还没有萌芽的时候，收获挖取块根，洗干净切成薄片后晒干，即为生何首乌，其生品能够消毒去浮肿，润滑肠道，缓解便秘。而其制品是取何首乌，以黑豆经过炖制或蒸制或酒制而成[1]。另外，现代药理学研究也证实，何首乌具有抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗衰老和提高免疫功能等药理活性，降低血脂和神经保护，有可能治疗神经退行性疾病和降低血糖[2]。何首乌除了抗氧化和降血脂效用外，药物机理的活性成分还包含有抗氧化黄酮类化学成分，如大黄素，芍药苷等，具有保健作用，其药效成分主要包括二苯乙烯苷类、蒽醌类以及黄酮类，二苯乙烯苷类中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-葡萄糖苷即THSG显示可调节机体各种生物活性分子通过多种途径发挥药理学作用，因此何首乌可作为中西结合治疗相关疾病的保健品或药品[3]。
近年来，随着专家学者对何首乌的研究持续深入发展，何首乌也越来越受到业界健康养生人士的广泛关注，但制何首乌较之何首乌的研究却甚少，本文欲通过对何首乌的炮制加工品制何首乌中的二苯乙烯苷类化学成分的有效提取，分离和鉴定，进一步为后续的二苯乙烯苷含量测定提供新型的研究依据。制何首乌中的二苯乙烯苷类化合物的测定上遇到诸多困难和阻碍，研究文献显示，随着何首乌的发展与直接应用，其对肝脏的用药不良反应增多，对肝脏功能影响较大，另外，在实际临床应用中，制何首乌的应用略多于何首乌[4]。本文希望通过此次对制何首乌中的二苯乙烯苷类化学成分的鉴定研究，进一步提高医学界对制何首乌的有效成分的分析，更好地服务于百姓的健康，挖掘更多制何首乌中的二苯乙烯苷及其他可利用的化学成分的药用价值和利于定性定量的分析。
1.2LC-QTOF-MS技术介绍和何首乌的炮制加工法
生物和细胞体内的代谢组学技术，是一种新颖又复杂的分析方法，可对目标化合物进行量化研究，目前该技术在重要质量控制领域覆盖面积广，运用深远[5]。另外，液质串联技术诞生于1970年初-1979年末，但受接口和离子化技术的制约，发展缓慢，到80年代中后期，出现了大气压离子化并使得其飞速发展，90年代出现完善的接口，并得到了仪器商品化，液相色谱质谱联用技术（LC-MS）已成为天然产物化学研究中最常用的分析方法之一，尤其是在中药材的质量控制和活性成分鉴定方面有着广泛应用。由于何首乌中的二苯乙烯苷类化学成分种类较多，传统的分离鉴定方法高效液相色谱（HPLC）在具有良好分离能力，定量准备的优点下，定性能力较弱，而质谱分析法（MS）虽灵敏度高，信息量大，但定量不准，而液质串联的方法使得液相色谱高效的分离优点和质谱的高敏感度融为一体，拥有超高效率、快速精准分析、质量范围宽、分辨率高、质量测量精度高（精确至小数点后第四位）的优点，对于复杂化合物成分，拥有排除干扰组分能力，对目标化合物鉴别能力颇高，广泛适用于验证组分错综复杂的二苯乙烯苷类中的化学成分，对重要复杂体系的定性定量分析具有明显优势。制何首乌中二苯乙烯苷类化学成分的LC-QTOF-MS鉴定，主要包括以下几个步骤：提取、分离、检测和鉴定。提取方法各式各样，如超声波提取，对于不同的成分需要选择不同的提取方法，提取效果有较大的差异。分离方法主要为层析法，如HPLC、UHPLC等，以分离出较纯的目标化合物。检测方法则是利用质谱技术对目标化合物进行检测和定量。鉴定主要是通过比对质谱数据库，制何首乌中的化合物的质谱图与数据库比较，确定目标化合物的化学式、分子量、碎片信息等。
未经炮制的生何首乌具有一定药理毒性，而炮制过的何首乌在临床使用更多，目前何首乌的炮制方法有很多，主要介绍三种主流的炮制方法。黑豆汁炮制法，是将黑豆放入锅中煮4小时取汁，然后取适量何首乌片放入黑豆汁中搅拌湿润，最后放入蒸制容器中密封，直到汁液被首乌吸干，颜色呈褐色。黑豆黄酒制法，是将何首乌洗净切片，先用黑豆汁拌匀，隔水蒸8小时，焖8小时至何首乌表面变黑褐色停止，自然晾干后用黄酒拌匀，高压蒸汽8小时，自然晾干即可。黑豆生姜制法，是将何首乌放入水中浸泡48小时后切成小块，将何首乌再放入水中浸泡48小时，后用黑豆和生姜煮水浸泡，将何首乌用蒸笼蒸至褐色即可。根据大量文献和研究报道[6-9]，在企业规模化生产中用的最多的工艺是黑豆汁高压蒸制4h。由于何首乌产地和炮制加工方法条件不一，无规范化的技术指南，造成何首乌有效成分的含量和测定结果随着不同炮制工艺而产生裱花，导致药材质量无法统一[10]，未建立符合中药材生产特点的质量评价体系，难以实现商品药材的标准化，因此，选择合适的提取工艺是何首乌药材制备中亟待解决的问题，当然，对何首乌进行质量评价的研究，还是以二苯乙烯苷类和蒽醌类主要活性成分的研究分析为主[11-13]。
1.3何首乌的研究状况与进展
当今社会，随着科技的发展和人们生活质量水平的大幅提高，三餐温饱不再成为大家的主要关注点，越来越多的普通人开始关注生活品质的提高，而健康的身体，无疑是享受高品质生活的基础和前提。可现实中，大多数年轻人都处于亚健康状态，甚至不如老年人的身体状态，疲劳、食欲不振、肌肉和关节酸痛，睡眠紊乱和机体免疫力下降等，而且肥胖、衰老加速、高血压、糖尿病、心脑血管疾病等患病比率不断攀升和年轻化，大家都开始寻医问药，开始研究养生之道，特别在广东尤其流行，例如服用保健品，中医针灸，祛湿茶提升精气神，这是未来发展大健康行业的一个普遍趋势，中药材养生作为饮食疗法渐渐进入人们的视线正中央。例如我们并不陌生的中药材，当归、丁香、芡实、马齿苋、决明子、何首乌等。制何首乌是何首乌的炮制加工品，具有滋补肝肾、补气血、乌发、乌须的作用，事实上，《神农本草经读》中有“久服强筋骨、益元气、延年益寿”，的记载，可见何首乌的保健作用，自古以来就被人们所公认，是一种强身健体的药物，也是人们在日常生活中，经常用来熬汤，熬制各种内调饮品的中草药之一，例如：何首乌黄精炖猪骨汤，宫寒气血虚、肾气不足的女生饮用此汤可以补肾补血，肾气足则头发乌亮有弹性，有预防改善骨质酥松和腰膝酸软等问题。
1.3.1何首乌的化学成分研究进展
据管淑玉等[14]在2005年的研究结果表明，何首乌主要含有二苯乙烯苷、蒽醌和磷脂等三大类主要成分，在高淑红等[15]2012年研究中，何首乌的化学成分有所变化，包括蒽醌类、黄酮类、二苯乙烯苷及其葡萄糖类、脂肪酸类和其他化合物类，如1，2-二羟基十九酮-3，五味子素，没食子酸甲酯，没食子酸，胡萝卜苷。随着检测水平的提高和科技的更新迭代，何首乌中的黄酮类和脂肪酸类和卵磷脂类化学成分也开始被广泛关注和研究，需要进一步挖掘其药用价值。早期研究中，制何首乌中被发现的单体化合物也逐渐增多，陈万生等[16-18]对中药制首乌（源产于广东）7种成分进行了结构分析，其中有一种新成分，命名为大黄素-3-乙基醚；五味子素为葛根植物中首次分离得到，是首乌护肝的有效成分之一。刘振丽等[19]对何首乌生品和制品，其化学组分的改变进行了分析，根据定性定量的质谱数据进行分析，检定出含有对苯二酚、琥珀酸和大黄素等在内的化合物。
二苯乙烯苷和蒽醌类化合物的含量是何首乌质量认定的主要标准，王雪婷[20]在《中华人民共和国药典》2020年版收载何首乌和制何首乌质量标准研究中指出，采用测定二苯乙烯苷和蒽醌类物质含量作为定量生何首乌和制何首乌质量的主要标准。余意[21]在研究中建立了黑豆汁炖制何首乌饮片的质量标准：二苯乙烯苷含量不低于0.70%，大黄素及大黄素甲醚总量不低于0.15%，多糖含量不低于20%，生何首乌含结合蒽醌含量（大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）不低于0.05%，制何首乌不低于0.100％。柴士伟[22]于其研究中提出采用高效液相色谱（HPLC）及高效液相色谱－质谱联用仪对生何首乌和不同工艺的炮制品中二苯乙烯苷的含量进行了测定，研究结果表明，在炮制后的何首乌中二苯乙烯苷含量相对比较稳定。王莹[23]在分析何首乌炮制后二苯乙烯苷含量变化规律时指出采用九蒸九晒法炮制何首乌后其二苯乙烯苷含量符合何首乌质量要求，且随着炮制次数的不断增加，二苯乙烯苷含量总体呈下降趋势。高慧宇[24]刘素标[25]研究中采用高效液相色谱法，研究何首乌不同炮制方法中的大黄素8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚、游离蒽醌和结合蒽醌的含量，结果显示，炮制后的何首乌中游离蒽醌和结合蒽醌含量范围分别为0.1-0.7和1.0-8.7mg·g-1，蒸制何首乌中的二苯乙烯苷、大黄甲醚、大黄素含量比高压蒸制何首乌中的含量低。
1.3.2何首乌的药理作用研究进展
二苯乙烯苷，又名芪多酚，是一种多羟基芪类化合物（polyhydrostilbenes)，在青苔和高等植物中均有分布，其分子量为406.39，化学式为C20H22O9。二苯乙烯苷是一种在真菌侵染、化学紫外灯照射、机械损伤等逆境条件中，在植物体内生产的一种抗性物质。何首乌是我国传统药用植物之一，从中药何首乌生品中分离得到的二苯乙烯糖苷，主要有2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷。《中华人民共和国药典》收载何首乌含量测定的方法。中药材何首乌中二苯乙烯苷含有丰富的药学利用价值，在当今全民养生浪潮不断增长的趋势下，它的研究和使用价值非常显著。
2,3,4′,5-tetrahydroxystilbene 2-O-D-glucoside是从蓼属植物物种的根里分离出来的，能够抑制5-HETE,HHT and thromboxane B2的形成。二苯乙烯苷是一种类白色结晶粉末，可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有机溶剂，来源于何首乌，用途多样，具有脑保护，清除自由基，降血脂，肝保护，抗肿瘤，舒张血管，抑制动脉粥样硬化的作用，一般用于含量鉴定和药理实验中，经过多种文献研究和报道[26-29]，其具有药理药效价值，第一个是延缓衰老的效果，按照“自由基”理论，过氧化脂质的产生和沉积会导致身体出现老化，所以过氧化脂质是评判身体老化的一项重要指标。研究指出，二苯乙烯苷在体外有很好的抗氧化作用，对氧自由基的清除能力也很强[26]。此外，二苯乙烯苷让细胞生存时间延长，原因在于谷氨酸介导神经毒性产生拮抗效应，让乳酸脱氢酶溢出数量呈现降低趋势，从而使细胞的死亡率下降[27]。在老年痴呆转基因动物模型的研究中,二苯乙烯苷能预防早期障碍，提高学习记忆力，保护神经细胞，对预防老年痴呆等神经疾病有良好应用前景[28-29]。二苯乙烯苷还能够降低血脂及抗动脉粥样硬化，降低全血粘度和红细胞聚集性。
1.4研究目的及意义
何首乌被广泛用于中药和保健品领域，其多种药理作用中，二苯乙烯苷类化合物是其最为活性的成分之一，它能显著地治疗肝病、神经系统疾病和心脑血管疾病等疾病。然而，目前对于何首乌中二苯乙烯苷类化学成分的鉴定仍然存在一定的难度。然而，目前对于何首乌中二苯乙烯苷类化学成分的鉴定还存在一定的困难。传统的实验方法对于何首乌中二苯乙烯苷类化学成分的鉴定存在一些不足之处。由于何首乌中的二苯乙烯苷类化学成分种类较多，传统的分离鉴定方法需要较长的时间和较高的成本，因此，采用高效的分析方法对于何首乌中的二苯乙烯苷类化学成分进行鉴定尤其重要。制何首乌中的二苯乙烯苷类化合物，还包含还原型二苯乙烯苷、白藜芦醇苷、黄酮苷等，LC-QTOF-MS技术因其高灵敏度、高分辨率和高准确性等优点而成为一种流行的药物分析手段。本研究旨在利用LC-QTOF-MS技术对制何首乌中的二苯乙烯苷类化学成分进行鉴定，通过对何首乌中定量指标–二苯乙烯苷的有效鉴定，检测出具体的化合物分子式，荷质比、分子质量来反应中药材的质量，为制何首乌作为一种植物药材的合理利用提供科学依据。
二苯乙烯苷化学成分的鉴定需要参照质谱数据库，但目前质谱数据库中涉及制何首乌中化合物的信息较为有限，需要不断更新完善。制何首乌中的二苯乙烯苷类化学成分具有多种结构类型和亚型，需要进一步探究其分子结构和生物活性之间的关系。不同的提取方法和分离条件对于不同的化合物具有不同的适用性和效果，需要进行更加深入的研究和比较。本文采用LC-QTOF-MS技术研究制何首乌中二苯乙烯苷类化学成分，以提高其检测和鉴定的准确性和可靠性，从而为制何首乌的质量控制和药理研究提供更加有力的支持。期望通过化学标志物的测定，加强对制何首乌中二苯乙烯苷类化学成分生物活性和药理作用的研究，以开发和应用更加有效的中药治疗方案。
2材料与方法
2.1实验材料
本实验所用的何首乌样品，采集于广东，中国食品药品鉴定研究院副研究员杨建波对其进行了初步的鉴定。
2.2实验仪器
2.3实验方法
2.3.1试剂
2.3.2样品的制备
清蒸工艺的制何首乌，参考《中华人民共和国药典》（2020年版，一部）（简称《中国药典》）通则（0213）黑豆汁炖制法[30-31]。首先将何首乌用小刀片切成1-2cm³的块状物，混合均匀后，取1份质量为50g,一共称取5份后置于锥形瓶中，加入50mL清水，搅拌至完全湿润即可，再和黑豆汁一起放入蒸锅中，水开始沸腾后开始计时，分别清蒸8h、16h、24h后将样品取出，干燥处理后粉碎，过40目筛，制得制何首乌。
2.3.3供试品溶液的制备
取制何首乌样品，人工粉碎成细小块状，用十万分之一的分析天平，称量块状样品0.5g，放入50mL三角瓶中，用量筒量取25mL乙醇溶液倒入（浓度为75％），采用超声震荡1小时，取出，自然放冷，再用70％甲醇溶液对其损失的重量进行补足，摇匀后，使用离心机离心15min（14000r／min），取上清液过滤，取续滤液，过0.22μm微孔滤膜，作为供试品溶液。
2.3.4色谱条件
色谱柱：AcquityUPLCHSST3C18(100mm×2．1illm，1．8 um，T3，Waters公司，X)；
流动相为：0.1%的甲酸乙腈(A)-0.1%的甲酸水(B)；
梯度洗脱条件:0-50min,10%-80%（A），50-55 min 80%（A），60 min 10%（A）；体积流速0.4mL/min；
进样量:5.0μl；
进样器温度:10℃；
柱温:35℃；
2.3.5质谱条件
采用ESI离子源，正、负离子模式来回扫描；
校正流速：5 uL/min；
扫描范围：m/z 50~1200；
毛细管电压：2.5 kV(正)和3.0kV(负)；
锥孔电压为：40V；
离子源温度均为：120℃；
缓冲气体:氮气，(纯度>99.99%)，流速:25 mL/min；
低质量扫描时碰撞能量：10~40V；
高质量扫描时碰撞能量：40~120V。
2.3.6数据统计与分析方法
本次研究的质谱相关数据分析，是通过沃特世公司的软件Masslynx（版本为V4.1）统一收集后可得到目标化合物的保留时间、离子碎片、加和离子、精确相对分子质量、峰识别、峰过滤、峰对齐等信息，最后得到总离子流图（totalion chromatogram,TIC）。通过和质谱图库的对比和筛选，可以鉴定出目标化学成分的结构类型和化学式。
3结果与分析
3.1制何首乌样品色谱轮廓图的建立及峰提取数据分析
生何首乌和炮制加工的制何首乌在上述色谱条件下分别进行正负离子模式下的数据采集，以制何首乌为代表的总离子流色谱图见图1和图2。
图1何首乌样品负离子模式的总离子流色谱图
Fig.1 Total ion current chromatograms of multiflorum sample in negative ion mode
图2何首乌样品正离子模式的总离子流色谱图
Fig.2 Total ion current chromatograms of multiflorum sample in positive ion mode
由上图可以看出，在正负离子模式下，何首乌和制何首乌样品在特征峰强度方面均存在差异，化学成分也存在一定差异；在负离子模式下，何首乌中的化学成分数量通过离子峰的个数要多于制何首乌中的化学成分，主要集中在5.95-34.89s/min化合物被检出的时间段；在正离子模式下，何首乌中的化学成分数量依然较之制何首乌要多，差异化化学成分主要在0.98-10.92s/min和26.82-33.76s/min的时间段被检出，以上结果可初步判断何首乌在炮制过程中，其化学成分与何首乌的化学成分均发生了一定改变，其化学成分的荷质比在何首乌炮制前后也有一定量的差异，制何首中的有效化学成分含量普遍降低，主要包括蒽醌类、二苯乙烯苷和黄铜苷类成分。二苯乙烯苷的含量降低，主要可能分析为糖苷键经高温蒸制易发生断裂，转变为相应的游离苷元成分，这些成分不易被液相色谱-质谱联用技术捕捉到。然而，由于色谱条件，或是样品制备方法等方面的因素影响，基线噪音较高，总离子流中的一个色谱峰并不是一个单一的化合物。
3.2负离子模式下制何首乌中鉴定出的二苯乙烯苷类化合物
表3负离子模式下制何首乌中二苯乙烯苷含有的化学成分
通过以上差异性分析，再通过结合文献报道及公共数据库查找的方式对总离子流图进行分析，通过导出的定性数据，在负离子模式下分离得到了228个可以代表制何首乌质量成分的单体化合物，包括二苯乙烯苷类、黄酮类和蒽醌类以及其他类化合物，本次主要挑选其中的二苯乙烯苷类化学成分进行确认。通过对制何首乌中的二苯乙烯苷类化合物的提取分离，本次筛选得到了8个二苯乙烯甘类化合物，具体情况如表1所示，分别是：2，3，5，4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-d-xyloside（2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-d-木糖苷）；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-(6”-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷；2，3，5，4’-Tetrahydroxystilbene-2-O-(2”-O-acetyl)-β-d-glucoside[2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-(2″-O-乙酰基)-β-d-葡萄糖苷]；2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-(4″-O-α-d-glucopyranosyl)-β-d-glucopyranoside；2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-d-(3″-O-monogalloyl esters)-glucopyranoside[2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-d-(3″-O-单甘氨酸酯)-吡喃葡萄糖苷]；2，3，5，4’-tetrahydroxystilbene-2-O-(2”-O-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside[2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-(2”-O-p-coumaroyl)-β-D-吡喃葡萄糖苷]；2，3，5，4’-Tetrahydroxystilbene-2-O-(2”-O-feruloyl)-β-D-glucopyranoside[2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-(2”-O-阿魏酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷]。通过检测数据发现，2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（THSG）这个化合物尤为特殊，在整个何首乌炮制过程中，被检测出的次数为26次，含量也较之其他单体化合物更多，是何首乌生品和炮制品中含量较高的化合物。其他单体化合物的成分复杂，主要在化学键位有差异性，有乙酰基和酰类，这也决定了何首乌中二苯乙烯的主要功作用。此外，制何首乌在《中国药典》中特征化学成分为2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，其在中药何首乌、制何首乌中的含量规定分别不应少于1.0%和0.70%。程燕燕等人的研究文章报道，何首乌炮制后THSG的含量较之生品有些许下降，并且炖制后二苯乙烯苷类的总含量也出现了降低的情况[7]。
3.3正离子模式下制何首乌中鉴定出的二苯乙烯苷类化合物
表4正离子模式下制何首乌中二苯乙烯苷含有的化学成分
二苯乙烯苷类成分也是中药首乌的主要成分，截止2015年3月，已从何首乌中分离得到20余个二苯乙烯苷成分，其中含量最高且研究最广泛的为THSG。根据表2得知，在正离子模式下制何首乌中二苯乙烯类化合物的物质有：2，3，5，4′-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)；2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-beta-D-glucoside(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-beta-D-葡萄糖苷)。尽管分离鉴定到的两个化合物的分子式一样，但是其化合物的名称和保留时间都存在差异，此次一共有2个二苯乙烯苷类目标化合物在本次离子喷雾的正离子模式下得到鉴定。其中，2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在正负离子模式下都被鉴定出，为二苯乙烯苷类化合物中含量最多的单体化合物。
4讨论
在此次制何首乌中二苯乙烯苷类化学成分的LC-QTOF-MS超高液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用技术鉴定研究实验中，二苯乙烯苷及其衍生物的含量在制何首乌中占比较多。它们是何首乌的主要活性成分，经过本次鉴定实验的研究，一共从此次制何首乌样品中鉴定得到了10种单体化合物，分别是含量最多的2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（THSG）；还有2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-（6″-O-a-D-吡喃葡萄糖）-β-D-吡喃葡萄糖苷；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-（2″-O-乙酰基）-β-D-葡萄糖苷；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-木糖苷；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-（2”-O-阿魏酰）-β-D-吡喃葡萄糖苷；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-d-(3″-O-单甘氨酸酯)-吡喃葡萄糖苷；2，3，5，4′-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside；2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-(4″-O-α-d-glucopyranosyl)-β-d-glucopyranoside；2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-(2”-O-p-coumaroyl)-β-D-吡喃葡萄糖苷;2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-beta-D-葡萄糖苷。对比文献分析近年来制何首乌中二苯乙烯苷类得到的化学成分鉴定结果，本研究实验中分离到到的2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-d-(3″-O-单甘氨酸酯)-吡喃葡萄糖苷，是一种新型的化合物，是本次实验中首次分离鉴定得到的新化合物，目前尚未命名。
目前，二苯乙烯苷类中的新化合物不断被发现，马双成博士的研究团队中，杨建波等人2022年最新的研究成果显示，从德庆县采集的何首乌样品中70%乙醇提取物中首次分离鉴定得到1个新的二苯乙烯苷类组分，名为（E）-2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷-6′-棕榈酸酯，其被命名为何首乌辛素[32]。可见何首乌的开发及应用研究在不断的深入，这些化合物的为何首乌的开发和临床应用研究提供更多参考价值。另外还有学者发现，何首乌素A，何首乌素B，何首乌素C，何首乌素D，通过生何首乌和制何首乌两种苷类测定的化合物差异化对比，发现生何首乌中还检测到了白藜芦醇和虎杖苷，但制何首乌中却没有发现这两个化学成分，间接表明在何首乌生品炮制工艺中，经过蒸制或炖制后中药何首乌中二苯乙烯苷类的有效含量少于生何首乌的。另外，何首乌用黑豆汁法炮制1天8小时，2天8小时和3天8小时当中二苯乙烯苷类化学成分，发现生何首乌随着炮制时间的推移，二苯乙烯苷的含量和被检测到的次数先升后降，在一天8小时中达到较大的值，随后达到一个相对平稳的状态，达到突跃点后，随二苯乙烯苷和结合蒽醌继续下降，游离的蒽醌含量则开始上升。
通过二苯乙烯苷类化学成分的分析，也说明了生何首乌的主要功效和炮制后的制何首乌的药理功效有着显著差别。近年来，二苯乙烯苷一直成为业界专家重点研究的内容，除了二苯乙烯苷、蒽醌具有清除自由基和延缓衰老的功效，二苯乙烯苷还拥有降低血脂的潜力，生何首乌服用可以提高血小板和红细胞的活性，但对于补血和补肾虚的功效来说，不如制何首乌效果那么显著。当然，何首乌服用后也存在药理毒性，生何首乌与制何首乌均有一定肝毒性，但生何首乌肝毒性比制何首乌大，何首乌经过炮制，其中的水解鞣质、二苯乙烯苷等化学成分的含量明显降低，其组分的改变与制何首乌的肝毒性降低之间可能存在某种联系，具体到底是什么化学成分和肝毒性直接相关，还有待进一步研究。
现阶段，关于何首乌炮制品当中的化学成分分离研究鉴定的文献报道较少，尤其是利用液相色谱-四级杆飞行时间-质谱串联技术的方法，更是鲜少，大部分是蛋白分析确定其空间结构和组分，而且对比生何首乌和制何首乌中的化学成分差异性研究，是否有新化合物的发现，是否产地批次不同的何首乌样品之间存在质量差异，应更深入系统的利用数据分析方法研究两者间的差异性，利用信息数据阐释何首乌中各类有效化学成分的具体分子式、结构、名称。从根本上解决何首乌化学成分分析的难题，为中药材的质量标准评判和鉴定提供科学的理论依据。
中医和中药在我国使用时间较长，且中药对我国医学的影响具有深远而重大的意义。从目前来看，对何首乌的各方面研究已较为深入，但是欠缺对制何首乌的化学成分的对比研究，且不同的炮制工艺对何首乌的成分影响较大，只有通过科学合理的炮制工艺将何首乌中有效成分做到最大优化，保留起高质量的用药部分，发挥更高的抗氧化、提升机体免疫力、降血脂抗甩来等功效，将肝毒性降到最低，减少药材的毒副作用。目前阶段，需要我们对炮制加工何首乌深度研究，并严格鉴定区分其不同化学成分分别有哪些，具有何种效用，因为这些化学成分物质是决定何首乌发挥最大价值的根基，且我们往后的主要研究内容更需要深入地、全面地做多成分分析的比较研究，目前本文的研究还较为单一化，这是还需要完善的地方。当然，还有必要对未鉴别的化合物进行深度研究和分析。
参考文献
[1]王亭,龚千锋.何首乌炮制后化学成分及药理作用的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2017,23(02):220-226.
[2]林艳,肖榕,李春,夏伯候,吴萍,林丽美,廖端芳.生/制/发酵何首乌化学成分、药理作用及肝毒性研究进展[J].中药新药与临床药理,2018,29(05):661-672.
[3]王浩,杨健,周良云,罗碧,程轩轩,张春荣,唐晓敏,潘利明,刘露,杨全.何首乌化学成分与药理作用研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(13):192-205.
[4]谭凯丽,廖海民.何首乌的药理作用研究进展[J].山地农业生物学报,2010,29(01):72-75.
[5]罗益远,刘娟秀,刘训红,王胜男,华愉教,兰才武,邢清清.超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱分析不同加工何首乌中差异化学成分[J].分析测试学报,2017,36(01):73-79.
[6]黄洁.不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响[J].智慧健康,2022,8(07):121-123+127.
[7]程燕燕.炮制工艺对何首乌成分的影响[J].临床合理用药,2023,16(08):151-153.
[8]许冬瑾,向飞军,陶艳,钟小芳,程文胜.多指标综合评分法优选何首乌炮制工艺[J].中国药师,2011,14(02):207-210.
[9]黄孟秋,孙连娜,董志颖,屠燕,邱实.产地加工炮制一体化与传统何首乌饮片化学成分的比较研究[J].中草药,2022,53(17):5293-5304.
[10]Chen H．，Chin．Med．Mater．(陈虹．中药材)，1990，13(9)：27—28．
[11]xu L Y，Dong Q，Hu F Z．J．Chin．Phnrm．Sci．，2009，18(4)：358—361．
[12]Zhu Z W，Li J，Gao X M．，P如m．Biomed．Anal．，2012，62：162—166．
[13]Li S G．Chen L L．Huang X J．，Asian Nat．Prod．Res．，2013，15(11)：1145—1151．
[14]管淑玉,苏薇薇.何首乌的化学成分和药理作用研究进展[J].中南药学,2008,No.33(04):454-455.
[15]高淑红,苏珍枝,肖学凤.制首乌化学成分及药理作用研究进展[J].山西中医学院学报,2012,13(02):74-77.
[16]陈万生,杨根金,张卫东,陈海生,乔传卓.制首乌中二种新磷脂类化合物[J].中国药学杂志,2001(03):11-13.
[17]陈万生,张卫东,乔传卓.制首乌低极性油状物成分分析[J].中药材,2000(11):684-685.
[18]陈万生,杨根金,张卫东,乔传卓,陈海生.制首乌中两个新化合物[J].药学学报,2000(04):273-276.
[19]刘振丽,李林福,巢志茂,宋志前,王淳,张玲.何首乌炮制后化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,2009,21(02):239-241+248.
[20]王雪婷,杨建波,高慧宇,宋云飞,程显隆,辜冬琳,王莹,马双成,魏锋.HPLC法测定不同产地生何首乌和不同炮制工艺制首乌中顺（反）式二苯乙烯苷含量[J].中国药物警戒,2023,20(04):383-387.
[21]余意,谢婧,刘颖,许煜迪,张晶,李丽,王光忠,肖永庆.黑豆汁炖制何首乌饮片质量标准研究[J].北京中医药大学学报,2020,43(04):317-326.
[22]柴士伟,邢彦超,高建等.何首乌及炮制品中二苯乙烯苷的稳定性研究[J].天津中医药,2022,39(07):934-939.
[23]王莹,辜冬琳,范晶,杨建波,刘越,王雪婷,汪祺,金红宇,魏锋,马双成.九蒸九晒炮制过程何首乌中5-羟甲基糠醛和二苯乙烯苷含量变化分析[J].中国药物警戒,2022,19(12):1291-1294+1308.
[24]高慧宇,杨建波,孙华,宋云飞,程显隆,王雪婷,魏锋,汪祺,王莹,靳洪涛,马双成.HPLC测定不同产区生何首乌和不同炮制工艺制何首乌中蒽醌类成分含量[J].中国药物警戒,2022,19(05):522-526.
[25]刘素标.不同炮制工艺对何首乌功效和活性的影响[J].临床合理用药杂志,2017,10(19):100-101.
[26]张飘,戚进.制首乌药理作用研究进展[J].海峡药学,2018,30(11):40-43.
[27]俞捷,谢洁,赵荣华,蔡少青,陈真.何首乌肝脏不良反应研究进展[J].中草药,2010,41(07):1206-1210.
[28]胡存华,赵立波,王晓敏,王嘉陵.二苯乙烯苷增强正常血管内皮细胞抗氧化作用研究[J].医药导报,2007(02):138-139.
[29]李雅莉,赵玲,李林.二苯乙烯苷对海马神经元细胞缺血性损伤模型大鼠的保护作用研究[J].中国药房,2006(01):12-14.
[30]Chinese Pharmacopoeia Commission.Republic of China:VolumeІ,2020 edition（中华人民共和国药典：一部,2020年版）[M].Beijing:China Medical Science and TechnologyPress,2020.
[31]杨建波,汪祺,王雪婷,程显隆,王莹,高慧宇,宋云飞,魏锋,马双成.基于植物代谢组学技术研究何首乌和制何首乌的差异性成分[J].中国药物警戒,2022,19(06):615-619.
[32]杨建波,汪祺,程显隆,王莹,高慧宇,王雪婷,宋云飞,魏锋,马双成.何首乌中1个新的二苯乙烯苷类化合物[J].中国现代中药,2022,24(08):1415-1419.
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