摘要
目的对不同炮制工艺的款冬花中的款冬酮的影响进行研究，优化款冬花的炮制工艺。方法通过正交试验方法，以款冬酮、醇溶性浸出物为考察指标，优选款冬花的炮制工艺。结果蜜炙款冬花最佳工艺为：加蜂蜜的量为30%，炒制时间为11min，闷润的时间为3h，甘草制款冬花最佳工艺为：甘草用量为6%，浸泡时间为14h，烘干温度为70℃。结论本实验工艺简单，稳定可行，材料易得，可用于款冬花的工业化生产。
关键词：款冬花；款冬酮；炮制工艺；醇溶性浸出物
一、前言
款冬花(TussilagofarfaraL)是菊科的干燥花骨朵。中药材香味芳香，苦涩味[1]。其主产地为山西、河南、陕西、甘肃等地区，为传统常见中药，具备止咳化痰、润肺止咳闭气等功效，《本经》有“寒束大肠经饮邪哮鸣，独适之”记载。若不温、润、燥，温之邪，大肠经气积而不得不纾解者也可以治之，外感内伤，寒热虚实干咳可以用。尤其是肺气虚久咳不止，最好。款冬花关键带有倍半萜、三萜、厚朴酚、黄酮类、碱、邻苯二甲酸酯、油酸以及酯和挥发性物质。现代科学研究发现，款冬花具备激动吸气、加速心跳、上升冠心病的作用，对毛细血管有伸缩功效，并且对血小板计数活化因子所引起的血小板凝集有抑制效果。另外还有抗氧化性、抗感染、抗癌、扩张眼瞳、提升泪腺分泌的功效[2]。
蜂蜜有养肺作用，而款冬花中润肺化痰的主要成分是冬酮，因此蜜的应用能提高款冬花润肺化痰的作用。蜜制作方法是一种传统式而悠久炮制方法，在中药蜜炙出现的时候，曾经有蜂蜜单方面应用并参加搭配的记载。用蜜制做中药时，一般选择中华蜜蜂或意大利蜜峰在蜂窝里制作出来的糖原。蜂蜜中主要带有葡萄糖水、葡萄糖和许多其他活性成分[3]。蜂蜜酿造中药时，蜂蜜里的杂志期刊许多，因此不是直接应用蜂蜜，只是通过提炼出，酿造蜂蜜可以追溯到《本草经集注》。那边记载了“炼”和“煎”二种方法的特制后蜂蜜一般分为软蜜、中蜜、老蜜三种，依据蜂蜜制作而成的中药与使用主要用途，选择采用哪一种蜂蜜。此外，在《雷公炮炙论》中，明确了特制规范“每一个特制蜜都是一斤，仅有12半，或是一分钟是数。火少得话，不可以太过并且用”。近年来随着中医的高速发展，蜜制作方法也飞速发展，最早是蜜煎，如《金匮要略》大乌头煎就是采用蜜煎的方法。唐朝医疗水平《食疗本草》记载了蜜炖的方法。《雷公炮炙论》记载了蜜蒸、蜜浸、蜜焙，这三种方法均是由前两者方法发展而来，最终成为现阶段比较常见的蜜炙方法[5]，但在实际操作中，先伴蜜后投药，先炒药加上蜜古时候中医炼蜜制中药，目地多见提高润肺化痰功效，如蜜炙金冬花，如《医家四要》中橘皮“痰咳蜜水炒”；还是能够提升生甘草蜜炙后彭中作用等滋补功效；也能缓解药效、减少毒副作用，如蜜炙香附后能降低干燥度，蜜炙麻黄能降低扩散实际效果；如果像《本草从新》里的升麻，降低其不良反应，用蜜水炒。
因而，中药炮制加工工艺并非一成不变的，随着人们的勇于探索与研究，不断涌现新方法，在临床实际应用中持续检测，替代原先老方法。
本试验主要研究了不一样炮制加工工艺对款冬花中冬酮相对含量危害，进而为挑选最好炮制加工工艺、标准款冬花炮制加工工艺提供参考，与此同时论述了生甘草款冬花炮制的炮制方法，为款冬花炮制带来了新理念。
二、材料与仪器
2.1材料
款冬花(Flos Farfarae)，广州康圣医药有限公司，批号20140401)；生甘草(Radix Glycyrrhizae，广东恒祥中药制剂有限公司，批号20121126))之上中药材经实验田素英评定合乎2010年版药典规定)；95%酒精(AR，江苏富强化工厂有限公司，批号：2014806)；工业甲醇(CR，天津四友精典有限公司，批号：20140523；冬酮标准品(我国产品所；超纯水系统(试验室自做)纯蜂蜜(阳江市、永宁镇，2014年3月10日))。
2.2仪器
JA2003-电子分析天平(上海舜宇恒平仪器设备有限公司)；CO225型电子分析天平(示值：0.01mg，德国Sartorius公司)；KQ-500型超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)；SHZ-d()型冷却循环水式多功能机械泵(佛山市英峪华仪器厂)；GZX-9240型电加热排风烘干箱(上海博信实业公司有限公司)；有机化学微滤(0.45m，津腾有限公司)；DG230-4线上脱气机(大连驻极体分析仪器有限公司)；LU230低电压梯度洗脱器(大连驻极体分析仪器有限公司)；P230髙压恒流泵(大连驻极体分析仪器有限公司)；UV230紫外线-由此可见探测仪(大连驻极体分析仪器有限公司)；EC2000工作平台(大连驻极体分析仪器有限公司))。
三、方法与结果
3.1蜂蜜的炼制
将纯蜂蜜180.000g放入锅中，添加冷水216.000mL，加热至沸腾，改成慢火保持微沸腾，清除泡沫塑料和上调的果蜡后趁着热用三层沙布过虑，渗沥液再度放入锅中烧开，使鱼泡显著。
3.2甘草水的煎煮
加入适量生甘草，放水100.000mL煎煮3次，保持沸腾。每一次煎煮30min，搜集煎液，随后过虑多次重复使用。煎煮环节中第一次用凉水，第二、第三次用开水[7]。
3.3正交试验因素
危害蜜炙款冬花中药炮制加工工艺的重要因素为入蜜量、炒过时长、煮熟时长，本试验选用L9(34)正交试验设计(表3-1)，以金冬酮成分、醇溶性浸出物为调查指标值，对于其技术水平主要参数。
本次中药炮制加工工艺要素论文参考文献[8]设定，危害生甘草冬天花炮中药炮制加工工艺的重要因素是生甘草使用量、侵泡时长、干燥温度。此次试验选用L9(34)正交试验设计(表3-2)，以冬天酮含量、醇溶出物为调查指标值，并对技术水平主要参数展开了甄选。
3.4款冬花的炮制
3.4.1蜜炙款冬花
取款冬花放入孔径0.5cm(2号筛)的孔筛中，清除细沙和灰屑残渣，清除残梗称重，分大小放入内置器皿预留。将特制蜜按一定比例放入清理好一点的药锅中，添加定量分析(特制蜜量50%)开水，使浓蜜变为稀香嫩，香嫩烧开出泡时玄火，放入锅里，用铁锨快速滚动拌和，使香嫩匀称粘在款冬花表层取下用香嫩调合煮熟的款冬花，放入药锅中煸炒，慢火煸炒至中药材表层呈棕褐色，用手抚摸不粘手，握稳，起锅冷后既成。
3.4.2甘草浸制款冬花
将称重好一点的款冬花按L9(34)正交试验设计浸在煎制后生甘草水里，电烤箱干躁至侵泡完毕。
3.5醇溶性浸出物
开展试件3.000g高精密计量检定，向100.000mL锥形瓶中高精密添加95%酒精60mL，安上，秤重，静放1小时之后，联接逆流冷凝器，水浴加热至烧开，维持微沸1钟头。放冷后，取出锥形瓶，密塞，秤重，称取降低重量放水，混匀，用干躁洁净的滤纸过虑，高精密称取渗沥液25.000 mL，放入恒重干燥蒸发皿中，沙浴煮熟后，105干躁3钟头。
3.6款冬酮的提取与含量测定
3.6.1款冬酮的提取
称取冬花粉末状(经四号筛)约1.000g，高精密称取，装栓锥形瓶，高精密加酒精20.000mL，秤重，超声处理(输出功率200W，工作频率40kHz))1h，制冷，秤重，酒精。
3.6.2款冬酮的含量测定
（1）款冬酮色谱条件
柱：Bostonc18(250mm4.6mm，5m)；流动相：工业甲醇-水(85:15，v/v；检验光波长：220nm；流动速度：1.0 mlml-1；柱温：室内温度；试件引入量：20L
（2）对照品溶液的制备
高精密称取冬酮标准品2.600mg，放入50.000mL容量瓶中，添加流动相融解，滴定剂至标尺，混匀做成浓度为51.688GML-1的冬酮标准品溶液，放入电冰箱储存。
线性考察
高精密汲取对比溶液适当，用流动相稀释液，获得梯度方向浓度值系列产品对比溶液：212.000、159.000、106.000、79.500、53.000、26.500 gmL-1。各自高精密汲取之上溶液各20L，按浓度值引入3次，以浓度为x座标，峰面积为y坐标开展多元回归分析。
（4）精密度试验
收集试品溶液，按(1)项色谱分析标准，在相同的情况下持续气相6次，测定冬酮峰面积，测算相对平均偏差RSD值。
重复性试验
中药炮制后冬花1.000g做为试品溶液，平行面制取6份，各试品溶液各自按(1)项色谱分析条件分析1次，测定冬酮峰面积，测算RSD值。
（6）稳定性试验
再次制取6份供试品溶液，室内温度摆放，按[1]项标准在0h、1h、2h、3h、4h、5h内各测定1次，5h测定6次，纪录万隆峰面积，测算RSD值。
（7）加样回收率试验
高精密称量款冬酮对照品适当，加工业甲醇溶液融解，配出26.500、53.000、106.000ug·ml-1低中高级三种浓度值，高精密汲取3份已经知道款冬酮含量的同一份试品溶液1mL，各自高精密添加低中高级3中浓度对照品溶液，添加量分别是0.053，0.106，0.212mg，再将工业甲醇缓解压力烧干，做成供标准溶液，每次气相3次，纪录峰面积，测算利用率和RSD值。
四、结果
4.1方法学考察结果分析
4.1.1线性考察
得出回归方程为：y=42137x+68285 R2=0.9990得标准曲线，(见图1)。
图1款冬酮的标准曲线
4.1.2精密度试验
峰面积的RSD值为2.300%。结果(见表4-1)
表4-1供试品的精密度试验结果
4.1.3重复性试验
计算款冬酮的相对标准偏差RSD值，结果RSD值为38.723%。结果（见表4-2）
4.1.4稳定性试验
计算相对标准偏差RSD值。结果样品的峰面积的相对标准偏差RSD为1.451%，结果（见表4-3）
4.1.5加样回收率
款冬酮的平均加样回收率为35.688%，RSD为36.488%，结果（见表4-4）
4.2蜜炙款冬花结果分析
以上实验结果表明，影响提取效率的因素依次为A>B>C，三个因素均无显著性差异，最佳工艺条件为A2B2C2，即加蜂蜜的量为30%，炒制时间为11分钟，闷润时间为3h。
4.3甘草制款冬花结果分析
评分标准：综合评分=醇溶性浸出物×30%+款冬酮含量×70%
以上实验结果表明，影响提取效率的因素依次为B>C>A，最佳工艺条件为A1B2C3，即甘草用量为6%，浸泡时间为14h，烘干温度为70℃。
五、讨论
5.1提取方法的确定
依据开始的构想是采用煎煮法来获取款冬酮的，但做了预实验以后发现，如果使用煎煮法，则环境温度非常容易太高，造成款冬酮溶解，对试验的结论导致偏差，但是经过查找文献，找到超声提取的办法，使用方便，并且提取高效率也很高，因此最终选择了超声提取的办法。
5.2流动相比例的确定
在配流动相时，试过75%，90%，95%，可是出的峰都存在托尾的情况，经过长时间的实验，确认了流动相占比需要在80%-90%中间为宜，后结果表明流动相占比最好为85%，峰形不错，拖尾现象轻微，出峰期为8.3min以内。
5.3不足之处
此次试验中只对炮制后款冬花开展款冬酮和醇溶性浸出物的测量，并没开展水份，灰份等质量检测。因而，产品质量标准也有亟待完善。
辅料在炮制中应用现状概况
中药炮制起源于春秋时期，《雷公炮炙论》、《炮制秘笈》、《修事指南》等一些炮制著作载于了很多的中药炮制方式，对现代中药学得应用和发展趋势具备中药的价值，现如今中药炮制已经是中药课程不可或缺的一部分，都是传统中医药特点的重要体现，这是依据中医学理论专业指导，根据浸制，净制，水制，火制，火金共制等炮制方式，从而达到改进药效、提升药力、减少或消除药品毒副作用作用，矫味矫臭等作用[1]我们常说“是药三分毒”，在我国古时候中医所使用的药品主要以中草药材为主导，而中草药材含有的成份繁杂，甚至有一些带有有毒，但有些中药的毒性成份刚好是医治疾患的有效成分亦或毒性中药是预防某些疾病所不可缺少的一部分，如在治疗中服药不合理就很可能发生病人死亡的状况，因此这些毒副作用作用通常制约了毒性中药的应用[2]。这一分歧早就导致了古时候中医的高度重视，伴随着持续的实践探索，古时候中医慢慢理解了根据不同的有害中药使用不同的炮制方式来开展降毒规律性，如斑蝥能通过加温降毒，乌头能通过水焯降毒等。随着科技的发展，这一祖国药业国粹仍然传承和发展趋势着。
六、本文主要是综述近年来中药炮制各自的研究概况。
6.1蜂蜜在炮制中应用的研究
蜂蜜别名石蜜，在《神农本草经》记载为佳品。苏恭谓：“此蜜既蜂作，宜去石字[3].蜂蜜味道柑平，有益气，润肺止咳化痰之效，适合于腕腹隐隐作痛；咳嗽痰多等不适[4].外敷可以治疗水火烫伤等，并用以中药炮制祛毒或协作药力及其解乌头毒等[5]。
6.2炼蜜的目的及作用
蜂蜜除开作为一种食品类以外，还是一种宝贵的药用辅料，在中国中药炮制中常会采用[6]。与其它药用辅料对比，蜂蜜做为辅材使用中，有着独特的“提练”特点。
蜂蜜在收集蜂花粉的过程当中，有害蜂花粉也不可避免被采集到，导致所酿的蜂蜜有害[7]。历代的古医书中也常有记述蜂蜜有毒的东西状况，如明代《本草汇言》中出现了蜂蜜“活者有害”。《本草纲目》之中记述“炼过则无毒性矣”，这足以证明炼蜜能够“去毒”。此外，有研究表明[8-11]，炼蜜还可以去杂，杀菌，毁坏抗氧化物，减少水分含量增加粘性。常见作中药制剂黏合剂和赋形剂。
6.3炮制中蜜炙的作用机理
6.3.1协同作用
如桔梗，款冬花等通过蜜炙后，其润肺化痰的作用获得了提高。由于蜂蜜本身就具有润肺止咳化痰的作用，用蜂蜜炮制后当然可以增强药品的作用，具有协作的作用。又似糖生黄芪能够增强其滋补作用，都是相同的大道理[[12]。
6.3.2扩大治疗范围
大家都知道，地榆有清体内湿热的作用，主要用于“湿热证”[13]。可是地榆有微寒之性，对肠胃有一定的损害，若用蜂蜜炮制地榆后，可借助蜂蜜甘缓以调合地榆的微寒之性，又能够顾护肠胃。与此同时蜂蜜之甘可引地榆入上焦。蜂蜜之润可提升地榆祛火能力，使其清热解毒而不伤脾胃[14]。亦如生甘草蜜炙后原价了辛温养血缓急止痛的作用。
6.3.3减少不良反应
麻黄、桂枝以及具有扩散的作用，能出汗，扩散力好，易于损害浩然正气。因此表虚自汗，肺虚咳嗽、年老体衰不适合生用，一般常用蜜炙后炮制品，既可以提升宣肺平喘等功效，也可防止容易出汗等不良反应。其机制是乌药止喘作用是和含有的黄酮相关，出汗与含有桂皮醛相关[15].蜜炙后但是桂皮醛流失约一半左右[16]，而黄酮含量基本上没变化，从而降低了出汗的作用且不更改止喘的作用。
6.3.4解毒作用
马兜铃里面含有马兜铃碱和马兜铃算，口服会有头晕目眩、瞳孔放大、呼吸不畅等毒性反映，实际应用中有蜜炙后再用，使之毒性减少[17]。但在古时候，张仲景用蜜小水泡乌头，附子，目地其实是为了降低其毒性。当代科学研究也证明在乌头或是附子中毒了时，适度服用蜂蜜可以起到祛毒的作用[18]。
6.3.5矫味作用
动物的分类或其它带有不悦药味的中药，病人往往会因为其香味的极端且不喜爱服食，假如通过蜜炙后，就能消除让人不悦的腥味味道，有利于患者服食。此外，地榆关键带有小檗碱，地榆碱和粘液质，前者能与蜂蜜里的有机物发生反应，形成有机酸盐后能扩大水溶，同时降低苦涩味，有利于服食[19]。
七、甘草在炮制中应用的研究
7.1甘草对附子的减毒机理
生甘草炮制附子后祛毒作用是由于中含有二种成份，一个是甘草酸，一个是生甘草黄酮类。甘草酸在生甘草是以生甘草甜素的形式存在，甘草酸是通过甘草次酸和葡萄糖醛酸融合而成。甘草酸分子结构里面含有羟基，有酸碱性，可以和附子里的黄酮发生化学反应，形成不溶于水的物质大分子化合物，从而降低附子的毒性；此外生甘草黄酮类含好几个甲基，有酸碱性，可以和附子种含有的黄酮产生沉积，沉积含有酯型黄酮成份，生甘草人参皂甙，也有生甘草黄酮类物质成份。黄酮类物质成份与黄酮形成沉积，从而减少附子的毒性[20]。
7.2甘草对附子的增益机理
生甘草对附子的提质增效作用表现在二者各成份间的协作作用。生甘草本身是并没有强心剂的作用的，但是和附子一起使用比单一应用附子更容易使蛙的石蜡切片心血管收拢力提升[21]。同样四逆汤对麻醉后的家免低血糖情况变压效应科学研究也证明附子与生甘草共用后其强心剂变压作用比单一应用生甘草或是附子好。此外，附子单单使用可以导致心率失常，而附子与生甘草一起使用之后但可以拮抗作用心率失常，这应该是附子中溶于水的物质部分与生甘草里的化学物质协作作用，做到增益值效果。
八、常用炙法探析
中药炮制，是一项历史悠久制药技术，由于中药多来自绿色植物，但只能够通过炮制这一工艺流程以后才可以被临床医学应用。炙法是许多炮制方式中不可或缺的一部分。这是将药品与液态辅材一起摆放药锅中加温煸炒，使辅材渗透到药品组织内部或附着于药物表层，从而达到更改药效，提高冶疗或减少毒性的作用。。
8.1蜜炙法
蜜炙是把蜂蜜提练后，再进药品翻拌闷润，随后炙炒到香嫩被吸尽截止。蜂蜜本身是一种常见中药，具有清热、润肺、润肺化痰等作用，当蜂蜜做为辅材时主要用于润肺化痰、益气中药的炮制。炮制时使用的蜂蜜都是经过提练的，蜜炙后的药材具备滋补肠胃、润肺化痰、祛毒、矫味及缓解药效的作用。如黄茂蜜炙后能增强其益气的功效，气血虚血弱病人尤为可用。草荡子、白前、紫苏子经蜜炙后，润肺止咳化痰力提升，医学上主要用于肺虚咳嗽的治疗方法。
8.2酒炙法
酒炙，将净选或净制后药品添加一定量酒拌炒的方式。酒炙中药在中国已有悠久历史，中药炮制常见酒有米酒和白酒两类，炙药时常见米酒，浸药的时候用纯粮酒。药品经酒炙后，有利于相关成分总混，从而增加功效。酒炙的作用[24]:①更改药效，引药上涨。如黄芩、黄琴、地榆，味道大苦小寒，性本地基沉降下滑，一般用于消除中、体内湿热。酒炙后不仅缓解寒凉，免伤脾胃气血，同时可酒醉的升提力量引药上涨，以清上焦邪热。②提高活血通络作用。如川芍经酒炙后，可以增强活血行气止疼作用。川芎既可以补血补气，又可活血化瘀，酒炒则该活血化瘀作用提高。③减少药品的毒副作用作用。生大黄有造成腹疼、恶心想吐、恶心呕吐等胃肠道反应，而熟大黄则无以上消化系统不适感反映。常山县能扣吐、截疟，若用以治疗疟疾，须酒炙，方可牵制其扣吐作用。④矫臭除腥。如乌肖蛇、薪蛇、紫河车等，药经酒炙后，可减其腥味儿。
8.3醋制法
即加入定量分析白醋拌炒，一般先拌醋后炒，但对于树脂类或动物的粪便则先要炒药至表层发光(树脂类)或外表色调更改，有腥气外溢(动物的粪便类)，再喷撒定量分析白醋，不然容易使药品粘接成块，遇热不匀。醋制也是有减毒作用，如甘遂可促成恶性肿瘤、致炎等毒性反映，经醋制后能够降低这种毒性反映。
九、结论
炮制辅材就是指具备协助作用的额外原材料。做为外来要素，辅材品质的好坏直接影响炮制品的品质与临床应用。可是，现阶段炮制辅材的技术标准科学研究却远远落后于炮制品的产品质量标准科学研究，这样的情况显而易见是不合理的。因而，现阶段需要解决中药质量管理的全流程，一定要重视中药中药饮片炮制规范性科学研究，也一定要重视中药炮制的根源，即炮制辅材的规范性科学研究。开展中药炮制辅材的探索，是保障临床治疗高品质中药饮片的前提条件，也将会对炮制科目的发展趋势具有促进作用。
致谢
国将兴，必贵师而重傅。感谢在我学习生活中遇到的每一位老师、长者。大学生活即将结束，毕业论文不仅是对大学期间所学知识的综合运用，也是给自己大学生活的答卷。对我而言，对理论知识的学习不够深刻，在知网、维普等学术平台进行了大量的论文阅读，并得到了老师的悉心指导。在此郑重感谢我的论文指导老师。学贵得师，再次真挚的感谢老师对我的指导与关怀。
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